目的：探讨SD大鼠原代肝细胞分离的影响因素和方法；建立经SD大鼠颈动脉途径脾动脉插管肝细胞移植的动物模型，探讨脾动脉与脾脏直接注射两种途径肝细胞移植治疗急性肝衰竭（Acute hepaticfailure,AHF）大鼠的疗效。方法：大鼠肝细胞的分离采用两步法，并在灌注条件等多方面加以改进。采用D-氨基半乳糖（D-gal）诱导大鼠的AHF24h后，65只大鼠经颈动脉途径脾动脉插管，60只成功后随机分为3组:Ⅰ组（n=20）经脾脏直接注射约2×107个肝细胞、肝动脉注射0.4ml Hank’s液；Ⅱ组（n=20）经脾脏直接注射0.4ml Hank’s液、脾动脉注射2×107个肝细胞；Ⅲ组（n=20）经脾脏直接注射0.4ml Hank’s液、肝动脉注射0.4ml Hank’s液。观察每组大鼠的生存率及肝功能变化情况,追踪脾动脉移植荧光示踪剂CFDA SE标记的肝细胞，HE染色观察脾内肝细胞病理变化和免疫荧光观察白蛋白合成作用情况。结果：大鼠肝细胞分离存活率达85%-95%。Ⅰ组14d存活率显著高于Ⅱ组（P=0.031,<0.05）,Ⅱ组14d存活率也高于Ⅲ组(P=0.048，<0.005)；Ⅰ、Ⅱ组都能明显改善AHF大鼠的肝功能，尤其以Ⅰ组最为显著；Ⅱ组CFDA SE荧光标记的肝细胞经脾动脉移植7d后，受体大鼠脾脏和肝脏可以看到散在绿色荧光分布；Ⅰ、Ⅱ组移植14d后，白蛋白共焦免疫荧光结果表明，脾内有肝细胞白蛋白绿色荧光信号；Ⅰ、Ⅱ组移植7d后,HE染色可以看到肝细胞在脾脏红髓中簇集在一起并定植下来。结论：胶原酶、PH值、灌注液、灌注方法等均是影响肝细胞分离存活率的因素；经大鼠颈动脉途径脾动脉插管肝细胞移植能提高AHF大鼠的存活率和改善其肝功能；脾脏直接注射法肝细胞移植改善AHF的大鼠生存率和肝功能更优于脾动脉途径。