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目的1.通过检测EZH2(enhancer of zeste homolog2)在舌鳞状细胞癌(tonguesquamous cell carcinoma, TSCC)细胞系和舌癌组织标本中的表达,比较舌鳞癌组织、舌鳞癌细胞及正常舌体组织中EZH2的表达差异。结合临床数据和随访资料,评价EZH2表达水平与临床参数和治疗预后的相关性,确定其作为新的肿瘤标志物在舌癌诊断和预后判断中的价值。2.通过化学药物抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)干预及siRNA技术抑制EZH2,观察其表达降低后对舌鳞癌细胞表型的影响(迁移、侵袭、增殖与凋亡),进一步探讨EZH2在舌鳞状细胞癌发生发展过程中的生物学作用,为日后以EZH2为靶点的抗肿瘤生物治疗奠定基础。方法(1)应用免疫组织化学染色方法检测EZH2在舌鳞癌组织及正常舌体组织中的表达,分析EZH2的表达水平与相关临床病理参数及患者总体生存率之间的关系。(2)应用免疫荧光细胞染色方法检测EZH2在舌鳞癌细胞系Tca8113、SCC9、SCC25中的表达和定位。(3)应用Western Blot和Real-time PCR方法检测EZH2在正常舌体组织、舌鳞癌组织及细胞系Tca8113、SCC9、SCC25中的表达。(4)应用Western Blot方法检测化学抑制剂DZNep干预和EZH2-siRNA体外细胞转染后EZH2的表达变化。(5)应用划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、MTT(四甲基偶氮唑蓝微量比色法)及流式细胞仪技术测定抑制EZH2表达后,舌鳞癌细胞系Tca8113的迁移能力、侵袭性、增殖及凋亡的变化。结果(1)免疫组织化学染色结果显示:52例舌鳞状细胞癌组织中42例EZH2呈强阳性表达(80.77%),其余为弱阳性表达(19.23%)。12例舌正常黏膜组织中9例EZH2呈弱阳性表达(75%),其余为阴性表达(25%)。因此,EZH2在舌鳞状细胞癌组织与正常舌体组织中的表达有显著差异(P <0.001)。在所研究的52例舌鳞状细胞癌患者中EZH2表达与肿瘤病理学分级(P=0.033)、颈淋巴结转移(P=0.036)、局部侵润性(P=0.012)有关,而与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床分期无关(P>0.05)。结合临床随访资料,对患者总体生存情况进行分析,发现EZH2高表达组患者的总体生存率明显低于低表达组患者(P=0.028)。(2)细胞免疫荧光染色显示:EZH2在舌鳞癌细胞系Tca8113、SCC9、SCC25的表达主要位于胞核内。(3) Western Blot和Real-time PCR显示:舌鳞癌细胞系及舌鳞癌组织中EZH2表达水平明显高于正常舌体组织。(4) Western Blot显示:加入化学药物抑制剂DZNep或EZH2siRNA体外转染后显著降低了EZH2在舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达。(5)划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、MTT及流式细胞仪技术显示:DZNep处理及siRNA干扰后EZH2表达降低抑制了舌鳞癌细胞的迁移、侵袭性及增殖能力,并促进其凋亡。结论(1) EZH2在舌鳞状细胞癌组织及细胞中表达增高,并与肿瘤病理学分级、颈淋巴结转移、局部侵润性及患者总体生存率显著相关,提示EZH2的异常表达可能与舌癌的发生发展有关。EZH2可能是舌癌的潜在分子标记物。(2) EZH2与舌鳞癌细胞的迁移、侵袭性、增殖及凋亡有关,可能是潜在的抗肿瘤生物治疗靶点。