中药颗粒剂由于载药量大,使用方便,便于携带,易于储存保管,剂量准确,便于调配,符合中医临床用药习惯等特点,成为中药新药研发的主要遴选剂型。目前中药精制技术中应用最广泛的方法是水提醇沉法、大孔树脂法、膜分离法。本文以膜分离法、大孔树脂吸附法、水提醇沉法为技术基础,以骨痹颗粒复方及组方药味为模型药物,对三种不同精制技术所得中间产物喷干粉的吸湿性能及吸湿物质基础进行了初步研究。本论文的主要研究内容与结论如下。1.骨痹颗粒三种精制方法的最优工艺研究实验第一部分以指标性成分川续断皂苷Ⅵ、柚皮苷、总黄酮、总皂苷、固含保留率等为指标。综合考察了水提醇沉工艺、膜过滤工艺、大孔树脂吸附解析工艺。得最优工艺条件如下:水提工艺:加10倍量水,提取2次,每次1.5h。醇沉工艺:加入乙醇,使乙醇最终体积分数为50%,室温静置12h。大孔树脂工艺:采用D101型大孔树脂,取骨痹颗粒提取液(含生药0.3g/ml)上样,径高比为1:8,上样流速为2BV/h,上样量为1.17BV。上样后使用4BV蒸馏水洗脱水溶性杂质,洗脱剂采用70%乙醇,流速为2BV/h,用量为5BV。膜分离工艺:采用0.2μm氧化铝陶瓷膜,在药液浓度0.05g生药/ml,药液温度30℃,压力0.15MPa,流速5m/s的条件下进行膜分离操作。2.不同精制工艺条件下不同精制液喷干粉体的吸湿性研究在不同精制工艺的基础上设计了一系列实验,考察了骨痹颗粒复方在不同处理条件下不同精制部位喷干粉的吸湿性。结果显示:50%醇沉上清部位、70%醇沉上清部位、70%醇沉沉淀部位、85%醇沉沉淀部位、D101吸附上清部位、各级过膜液喷干粉体均显示出了较强的吸湿性,而50%醇沉沉淀部位、85%醇沉上清部位、D101吸附解析部位喷干粉均显示出了相对较弱的吸湿性。各级过膜液喷干粉的吸湿性也呈现出了如下规律:随着膜截留分子量的降低,所得精制液的喷雾干燥粉吸湿性呈现出了升高的趋势。由以上实验结果可以推测:在复杂的中药浸膏体系中,对中药的吸湿性影响较大的成分可能为一类分子量较小,极性较大的物质。3.骨痹颗粒复方单味药吸湿性物质研究在骨痹颗粒这个极其复杂的中药复方体系下研究中药水提物喷干粉的吸湿性比较复杂,也不利于发现一些规律。本章实验参考前面的实验研究结果与相关文献研究,参照中药方剂研究中使用较多的拆方方法,对复方组方药味水提液分别使用了 80%醇沉处理、D101大孔吸附树脂的精制方法。研究了每一味药水提液中不同极性部位的含量差异和组方药味的水提提取率,测定了不同精制液喷雾干燥粉的平衡吸湿量并绘制了“吸湿百分率-时间”曲线,同时测定了不同药味各级精制液中总糖、总黄酮、总皂苷、总酚酸、总蛋白、总氨基酸的含量。结果显示:每一味药的水提提取率,极性部位与非极性部位的比率都存在差异,不同精制部位喷雾干燥粉的吸湿性均存在差异。8味药中牛膝的水提提取率明显比其他药味高,其极性部位与非极性部位的比率明显高于其他药味,且原液喷雾干燥粉的平衡吸湿量在8味药中最高,这都提示了牛膝对骨痹颗粒复方的吸湿性存在较大影响。不同精制液中6类成分的测定结果显示:糖类与氨基酸的含量与各级精制液喷干粉的吸湿性呈现明显的相关关系,提示在复方中糖类与氨基酸是对吸湿性影响较大的两类物质。以以上实验结果为基础,实验中又对不同聚合度的糖类与氨基酸的吸湿性进行了研究,并对它们在复杂中药体系中的吸湿表现进行了模拟研究。结果显示:①糖类的聚合度及种类与其本身的吸湿性呈明显的相关关系,随着聚合度的升高,糖类的吸湿性呈减弱趋势,某些小分子糖(果糖、核糖、甘露糖)本身具有强烈的吸湿性。在复杂的中药体系中,糖类对吸湿性的影响程度亦与糖的种类、聚合度、含量呈密切相关关系,本生吸湿性强的糖类对体系的贡献较大;②本身具有吸湿性的氨基酸仅有脯氨酸、赖氨酸、精氨酸,其中脯氨酸、赖氨酸具有极强的吸湿性,这两种氨基酸的含量大大决定了氨基酸对复杂中药浸膏体系吸湿性的影响程度。此外吸湿性亦与氨基酸种类和含量相关,氨基酸种类与含量的增加能不同程度的增强体系的吸湿性。4.骨痹颗粒组方药味中小分子糖类与氨基酸的检测及平衡吸湿量的测定到目前为止,关于中药复方浸膏粉复杂体系吸湿性的研究主要还是采用模拟体系的方式。如果能在复方或单味药中直接分离或检测到相关的吸湿性成分,并进行分析讨论给出相对合理的解释,则能直接证明对中药复方的吸湿性影响较大的物质基础,并能为中药提取物浸膏粉体吸湿性的控制提供理论参考。本章实验对6味水提提取率较高的植物药中的小分子糖类进行了检测与吸湿性的测定。结果显示:小分子糖类部分浸膏粉的平衡吸湿量均远远超过了 80%醇沉上清喷干粉的吸湿量,且平衡吸湿量的多少与小分子糖类的含量和种类呈密切相关性。提示了小分子糖类是骨痹颗粒复方浸膏体系中对吸湿性影响较大的一类物质。此外对氨基酸含量较高的土鳖虫水提物精制液研究发现:总氨基酸含量在土鳖虫80%醇沉精制液与D101精制液中的含量均在21%以上,且吸湿性氨基酸脯氨酸与赖氨酸的总含量均分别高达10.33%与8.06%,而732型阳离子树脂的水洗脱部位与氨水洗脱部位均未检测到氨基酸。结合四种精制液的喷干粉平衡吸湿量与吸湿性氨基酸的含量及总氨基酸的含量可以推测氨基酸种类及含量对体系喷雾干燥粉的吸湿性影响较大。提示氨基酸类成分亦是骨痹颗粒复方中对总浸膏吸湿性贡献较大的一类物质。本论文的创新之处:(1)系统评价了常用中药精制技术对喷雾干燥粉体的吸湿性的影响;(2)使用了中药方剂中常用的“拆方”方法,采用不同精制方法相结合的方法初步探索了中药复方的吸湿物质基础,为以后中药提取物的吸湿性研究提供了借鉴;(3)采用模拟的方法直接验证糖类与氨基酸在复杂中药体系中的吸湿;(4)发现小分子糖类与氨基酸类是骨痹颗粒复方浸膏粉体的主要吸湿性物质,且此两类物质的种类和含量与吸湿性密切相关。复方的有效性是复方精制技术的基础,也是进行其他研究的先决条件。实验采用指标成分作为精制工艺的参考指标,是中药工艺研究中常用的方法,但对于复杂的中药复方体系来说还是不够的。为此实验还对不同精制工艺条件下所制得颗粒的溶出度和中间体的药效作了评价研究。结果显示:不同精制工艺条件下的成分溶出度与药效均表现出一定差异,但均表现出了一定的药理作用。由于本部分不作为本论文的主要研究内容,主要研究结果与结论均见附篇。