胰岛素对人视网膜色素上皮细胞PEDF表达的影响

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[目的]  观察正常及高浓度葡萄糖(high glucose)条件下,胰岛素(insulin)对人视网膜色素上皮细胞增殖及其合成色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的影响,探讨胰岛素对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的影响。  [方法]  体外培养人视网膜色素上皮细胞(cultured human retinal pigment epithelial cells-19,ARPE-19),分别置于5.6mmol/L葡萄糖(正常浓度葡萄糖组)及30mmol/L葡萄糖(高浓度葡萄糖组)条件下,以不同浓度胰岛素(1U/L,10U/L,100U/L,103U/L,104U/L)分别予以干预,干预12小时、24小时、48小时、72小时,以MTT法检测细胞增殖情况;置于5.6mmol/L葡萄糖及30mmol/L葡萄糖条件下培养的ARPE-19细胞,以不同浓度胰岛素(103U/L,104U/L)分别予以干预,干预12小时、24小时、48小时,以蛋白免疫印迹法(western blot)检测细胞胞浆中PEDF蛋白的表达量。  [结果]  MTT法显示:在正常浓度葡萄糖组,各浓度胰岛素对细胞增殖活力的影响差别无统计学意义(P>0.05);在高浓度葡萄糖组,各浓度胰岛素对细胞增殖活力的影响差别无统计学意义(P>0.05)。  蛋白免疫印迹法检测显示:(1)正常浓度葡萄糖组,作用12小时,胰岛素浓度103U/L、104U/L干预组均显示细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较空白对照组增高(P<0.05);作用24小时、48小时,胰岛素浓度103U/L、104U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较空白对照组减少(P<0.05);各个观察时点,胰岛素浓度104U/L干预组的PEDF蛋白表达量均较胰岛素浓度103U/L干预组增高(P<0.05)。胰岛素浓度103U/L及104U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白的表达随着作用时间延长有降低的趋势(P<0.05)。  (2)高浓度葡萄糖组,作用12小时,胰岛素浓度103U/L、104U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较空白对照组降低(P<0.05),其中胰岛素浓度104U/L组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较103U/L组低(P<0.05);作用24小时,胰岛素浓度103U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较空白对照组高(P<0.05);104U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较空白对照组略高,但差异不具有统计学意义(P>0.05),104U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较103U/L干预组低(P<0.05);作用48小时,胰岛素浓度103U/L、104U/L干预组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较空白对照组增高(P<0.05),且胰岛素浓度104U/L组细胞胞浆中PEDF蛋白表达量较103U/L组高(P<0.05)。各胰岛素浓度(103U/L、104U/L)干预组,细胞胞浆中PEDF蛋白相对表达量随着作用时间延长先减少后增加(P<0.05)。  [结论]  正常浓度葡萄糖及高浓度葡萄糖条件下,胰岛素不影响人视网膜色素上皮细胞的增殖;正常浓度葡萄糖条件下,短时间内(12小时)高浓度胰岛素能促进RPE细胞合成PEDF,随着作用时间延长,细胞胞浆内合成的PEDF蛋白量逐渐减少;高浓度葡萄糖条件下,短时间内(12小时)高浓度胰岛素能抑制RPE细胞合成PEDF蛋白,作用24小时后,高浓度胰岛素对细胞内PEDF蛋白合成呈促进趋势。高浓度胰岛素在高浓度葡萄糖条件下对PEDF合成的影响可能在胰岛素引起的糖尿病性视网膜病变恶化中起一定作用,但其相关作用机制仍需进一步研究阐明。
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