论文部分内容阅读
目的:在课题组的前期研究中发现新疆传统发酵驼乳(shubat)具有免疫调节作用,从中分离出的免疫活性肽能促进小鼠脾淋巴细胞增殖,使NF-κB、IL-6的mRNA相对表达量降低,IL-12、IL-23的mRNA相对表达量增加,可以促进小鼠脾淋巴细胞免疫调节作用,该作用可能与调节Th1/Th2平衡有关。此外,发酵乳品中含有多种益生菌,本研究欲对新疆传统发酵驼乳发酵菌和乳酪乳清中分离出的4种可能具有免疫调节作用的益生菌进行了研究,并且就其免疫调节作用机制进行了初步研究。方法:1)将四种益生菌进行冻干粉活化及扩大化培养,制备菌悬液备用;2)连续三天腹腔注射80mg·kg-1环磷酰胺制造免疫低下小鼠模型;3)动物实验:小鼠随机分为十一个组,分别给予高、低剂量的马乳酒样乳杆菌,东方伊萨酵母菌,高加索酸奶乳杆菌以及戊糖乳杆菌菌悬液,阳性药组给予高剂量双歧杆菌菌悬液,正常组与模型组给予相同体积生理盐水;4)测定指标:干预4周后取脾脏,胸腺,结肠计算脏器指数,CCK-8法检测脾淋巴细胞活力,全自动生化分析仪检测血清生化指标水平,采用流式CBA试剂盒检测血清细胞因子含量;5)测定基因表达水平:提取小鼠脾脏RNA,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测小鼠脾脏细胞中IFN-γ、IL-4、IL-10、MyD88、TLR-7的mRNA的相对表达量,探讨4种益生菌对免疫低下小鼠的免疫调节作用及其作用的信号通路。结果:1)对小鼠体重的影响:干预一周后,模型组小鼠体重显著降低(P<0.05),四种益生菌组小鼠体重差异具有显著性;2)四种益生菌组的脾脏和胸腺指数均显著增加(P<0.01),但对结肠指数的影响不具有显著差异;3)模型组脾脏淋巴细胞活力显著下降(P<0.01),四种益生菌组脾淋巴细胞活力显著升高(P<0.01);4)血清生化检测结果显示,四种益生菌能够不同程度降低免疫低下小鼠AST,ALT以及UREA水平,差异具有显著性(P<0.05)。但是对CREA水平无显著差异;5)血清细胞因子检测显示:与正常组相比,模型组IL-2显著下降(P<0.05),IFN-γ也出现显著下降(P<0.01),IL-4和IL-10显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性药组可使小鼠血清中IL-2,IFN-γ明显升高,IL-10显著降低。益生菌组均能使IL-2,IFN-γ显著升高,IL-6,IL-10显著降低,使血清IL-17A水平降低(P<0.05);6)信号通路研究结果显示:通过RT-PCR相对定量检测发现,与正常组相比,模型组的IFN-γ、IL-4、IL-10、MyD88及TLR-7均有显著升高(P<0.05);与模型组相比,益生菌组这五组基因均有显著下降(P<0.01)。结论:造模后的免疫低下小鼠的免疫应答向Th2方向偏移,给予益生菌菌悬液后不仅可使免疫低下小鼠的体重和肝肾功能维持在正常水平,提高免疫低下小鼠的脾脏及胸腺指数,脾脏淋巴细胞活力,调节血清细胞因子分泌,使Th1/Th2平衡向Th1方向移动。初步推断这四种乳源性益生菌能够通过MyD88依赖型TLR-7信号通路作用,并且对免疫低下具有一定的保护作用。