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实验目的:比较不同光能量对大鼠口腔感染性创口中杂菌的体外灭菌效果。
实验方法:选择临床上患有重度慢性牙周炎患者,使用隔湿棉将患者待取材部位进行充分隔湿,使用无菌刮治器取牙齿上近龈缘处的软垢,要求无血。取材后即刻将软垢放置于2ml的0.9%的无菌生理盐水中,于2h内送至微生物实验室,将菌液震荡30s后涂于普通琼脂培养基上,37℃培养24h后用于动物模型的接种。动物模型的建立:Wistar大鼠2只,体重150-180g,雄性,腹腔注射10%水合氯醛麻醉,在上颌第一磨牙腭侧建立1×2ram2创口,将牙龈及其下结缔组织去除,创口止血后,表面涂抹微生物实验室培养的细菌,常规饲养。48h后,大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉,分别使用3个无菌纸尖在创口处放置,并停留10s,然后放于2ml无菌生理盐水中,于2h内送至微生物实验室。将细菌样本震荡30s后涂于普通琼脂培养基上,37℃培养24h。将培养后的细菌放于无菌生理盐水中用麦氏比浊法配制成浓度为108CFU/ml的菌液,振荡30s。分为实验组以及空白对照组。实验组的菌液中加入甲苯胺蓝原溶液使其浓度为lmg/ml,避光静置2miN,空白对照组不需加入甲苯胺蓝。用移液器取l0Ou 1菌液放入96孔板中的其中一微孔内,共放入40个孔内,其中30孔用于实验组,余10孔为没有甲苯胺蓝的空白对照组。用移液器在各微孔内分别取20u 1菌液放入2ml无菌生理盐水中,作为灭菌前的细菌样本。光动力组保持光功率密度为265mw/cm,光能量分别以12J/cm,24 J/am2和48 J/am2进行照射,每组10个样本。光纤固定以0.3 cm2光斑大小照射,调节时间为45s(12J组),91s(24J组),181s(481组)。空白对照组不进行激光照射,共10个样本。实验组灭菌后使用移液器取20ul菌液放入2ml无菌生理盐水中作为灭菌后样本。空白对照组无需照射,直接用移液器取20 u l菌液放入2ml无菌生理盐水中作为空白对照组试验后样本。将各组实验前后的样本振荡30s,用无菌生理盐水按1:3稀释。移液器取20 u l菌液 涂于普通琼脂培养基37℃培养。培养24h后长出的菌落,进行照相,用软件(ImagePro Plus5.0)自动计数,记录数据。
实验结果:实验各组均取得了较好的灭菌效果。各组灭菌效果间存在明显差异。光能量48 J/cm2照射时灭菌效果最理想,12 J/cm灭菌效果最差。
实验结论:光动力疗法能够在体外条件下杀灭大鼠口腔感染性创口处杂菌,并且在光能量为48J/cm2时取得了很理想的灭菌效果,为以后的体内试验和临床研究中光能量的确定提供了参考。