乙酰辅酶 A 酰基转移酶 1(Acetyl-Coenzyme AAcyltransferasel,ACAA1)是硫解酶家族成员之一,又称过氧化物酶体3-酮脂酰辅酶A硫解酶,主要参与极长链脂肪酸、长链脂肪酸、支链脂肪酸的β-氧化、过氧化物酶体增殖调控和胆汁酸代谢等生理生化过程,是过氧化物酶体中脂肪酸β-氧化的关键调控酶。在过氧化物酶体中通过催化β-氧化,将3-酮酰辅酶A裂解产生乙酰辅酶A和酰基辅酶A,参与脂肪酸的延伸和降解,是细胞脂代谢过程中重要的调控基因,在脂肪酸氧化和脂质代谢过程中起关键的调控作用。ACAA1能够调节PPAR信号通路中脂肪酸氧化,参与维持脂质平衡。脂肪酸的氧化意味着脂肪酸含量的变化,其结果可能会影响畜禽肉类品质。为探索ACAA1基因对绵羊脂代谢的调控作用及其遗传多态性。本试验以ACAA1为目标基因,通过RT-PCR克隆ACAA1基因CDS区,并对其进行生物信息学和组织表达差异分析,以期了解其结构、预测其功能;然后,构建绵羊ACAA1基因过表达载体及siRNA干扰并将其转染至绵羊前体脂肪细胞,随后进行诱导分化,提取不用时期细胞RNA和蛋白,使用qRT-RCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测过表达和敲低ACAA1基因对绵羊前体脂肪细胞分化的影响;最后,针对该基因,通过PCR产物Sanger测序在绵羊群体中开展SNP检测,分析其遗传多态性,并将检测的SNPs与肉质性状进行连锁分析,以期筛选出与绵羊肉质性状相关的分子标记,为今后肉羊遗传改良及选育提供参考依据。主要研究结果如下:1、绵羊ACAA1基因CDS克隆、生物信息学及组织表达谱分析成功克隆小尾寒羊ACAA1基因编码序列全长1071bp,共编码356个氨基酸,理论等电点为7.48,为不稳定的碱性脂溶性亲水蛋白。ACAA1蛋白不存在跨膜结构与信号肽,含有25个磷酸化位点,3个N-糖基化位点和4个O-糖基化位点,其二级结构含有α螺旋(37.92%)、β折叠(12.64%)和无规则卷曲(49.44%),与预测的三级结构结果一致。ACAA1基因在小尾寒羊不同组织均有表达,且在肝脏、皮下脂肪、小肠表达量相对较高。2、ACAA1基因对绵羊前体脂肪细胞分化的影响(1)成功分离绵羊前体脂肪细胞,建立体外诱导分化体系。(2)测定了ACAA1基因在绵羊前体脂肪细胞诱导分化过程中表达变化,发现ACAA1在分化早期表达升高,随着分化进程逐渐降低,其mRNA和蛋白表达趋势类似于成脂标志基因C/EBPα。(3)在脂肪前体细胞中对ACAA1的表达进行了调节,探索了其对脂肪细胞分化的影响,发现在成脂分化过程中,过表达ACAA1基因可减少成熟脂肪细中胞脂滴数量及甘油三酯的含量,下调成脂标志基因PPARγ和C/EBPα的mRNA及蛋白表达;反之,干扰ACAA1基因增加脂滴累积及甘油三酯的含量,上调PPARγ和C/EBPα的mRNA及蛋白表达。3、绵羊ACAA1基因遗传多态性检测及其与肉质性状的关联性分析在杜寒杂交羊群体中,筛查ACAA1基因SNP位点。结果显示:ACAA1基因14个外显子中仅在第14外显子的3’非翻译区(UTR)发生g.1434A>G突变;3’侧翼区处发现g.1484C>T突变。不同基因型结合肉质性状关联分析显示:A/G位点3种基因型均与滴水损失显著相关(P<0.05);内含子14不同基因型与失水率、滴水损失显著相关(P<0.05),其余指标差异均不显著(P>0.05)。综上,本研究成功克隆了小尾寒羊ACAA1基因编码序列,明确了该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异。在绵羊前体脂肪细胞成脂分化过程中,干扰ACAA1促进前体脂肪细胞分化,过表达ACAA1抑制前体脂肪细胞分化,该基因可能是脂肪细胞分化的负调控因子。绵羊ACAA1基因两个SNP位点与滴水损失、失水率、部分肉质性状存在一定的相关性。本研究为进一步探索绵羊ACAA1基因功能及肉质性状选育等相关研究提供理论基础和参考依据。