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干扰素(Interferon，IFN)是一类具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用的细胞因子。口服免疫是一种操作方便且易于接受的免疫形式，并且动物的口腔、咽部及肠道的粘膜血管丰富，存在较多的IFN受体，IFN易被该部位血管直接吸收，并且Ⅰ类干扰素耐酸，pH2.0～10.0中很稳定，能有效诱导黏膜系统的特异性免疫力。 本研究将构建的原核表达质粒pET-22b-ChIFN-α，转入E.Coli.BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后，表达出重组包涵体蛋白ChlFN-α，经变性、纯化、复性后得到能够满足后续实验的较纯的重组鸡干扰素。将ChlFN-α稀释到活性约为2.5×104U后与灭活H9N2禽流感病毒共同以口服的方式免疫SPF鸡，探讨短期口服干扰素及长期口服干扰素与灭活疫苗联合使用对动物免疫的影响。动物实验分为对照组（生理盐水）、干扰素组(ChIFN-α)、疫苗组（灭活H9N2）、联合组(ChlFN-α+灭活H9N2)，以口服的方式对SPF鸡进行免疫，每2天加强免疫一次。短期口服干扰素的实验为在处理后的0d、1d、2d、3d、4d取对照组和干扰素组SPF鸡的血液、胸腺、脾，通过荧光定量PCR的方法测细胞因子的水平;长期口服干扰素的实验为在初次处理后的第0、1、2、3、4周取对照组、疫苗组、联合组SPF鸡的血液、胸腺、脾，通过荧光定量PCR的方法测细胞因子的水平，结果:1）长期口服用药在一定程度上能够增强机体的免疫力且外周血和脾脏的数据表明联合口服灭活H9N2和干扰素的效果优于单独口服干扰素的效果。2）短期多次口服ChlFN-α在一定程度上能够延长干扰素作用时间。本研究旨在为干扰素作为免疫增强剂在养殖业的使用提供指导意义。 另外，本试验从H9N2亚型流感病毒A/chicken/Hunan/04.14(H9N2)核酸中扩增了HA的基因编码序列，克隆测序后，采用体外转录方法制备RNA。用RNA保存液稀释至含量约109Copies/μL。分装后进行均匀性和稳定性检验，通过4家实验室协作标定，取平均值作为定值结果。此外，本研究建立的实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测技术，对临床样品进行准确检测验证，检测限可达10个拷贝。结果表明，本研究制备的核酸参考品可作为H9N2亚型流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量参考品。