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目的和意义:肺癌的发生和发展是一个涉及多基因改变的多阶段复杂过程。抑癌基因的失活、癌基因的活化以及DNA复制过程中各种修复基因缺陷与肺癌的发生和发展关系密切。O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT）是最具代表性的DNA修复基因之一,它是一种高效DNA直接修复酶,主要修复烷化剂导致的DNA损伤,保护染色体免受烷化剂的致突变作用、致癌作用及细胞毒作用的损伤,对维持基因组稳定性有重要意义。MGMT基因的表达与肺癌的发生和发展关系密切。本研究旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histonedeacetylaseinhibitor,HDACI）曲古抑菌素A（TSA）对肺癌A549细胞株的生长抑制作用,观察DNA甲基转移酶抑制剂（DNA methyltransferase inhibitor,DNMTI）5-氮脱氧胞苷（5-aza-CdR）和TSA对肺癌A549细胞系中MGMT基因甲基化状态及转录水平的影响。探讨肿瘤抑制基因DNA甲基化与基因转录沉默的关系,进一步探索通过改变肺癌细胞MGMT基因甲基化来治疗肺癌的新思路。方法:1、体外培养肺癌A549细胞株,以噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度TSA处理后细胞生存率的变化。2、分别和联合应用5-aza-CdR和TSA作用于肺癌A549细胞后,应用经典方法蛋白酶K消化,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀抽提细胞基因组DNA,用Trizol试剂提取细胞基因组RNA。基因组DNA经亚硫酸盐修饰后,应用甲基化特异性PCR（methyl-specific PCR,MSP）方法检测经5-aza-CdR和（或）TSA作用后及未加药对照组A549细胞中MGMT基因的甲基化状态。采用逆转录-PCR（ReverseRranscription- Polymeras Chain Reaction,RT-PCR）技术检测经5-aza-CdR和（或）TSA干预后及未加药对照组肺癌A549细胞中MGMT基因的mRNA表达水平。结果:1、TSA对体外培养的肺癌A549细胞呈不同程度的生长抑制作用。在一定范围内,随处理时间的延长和给药浓度的增加,TSA对A549细胞的抑制率逐渐升高。TSA在24h、48h和72h对A549细胞的IC50分别是1622.13 nmol/L、490.91 nmol/L和257.24 nmol/L。2、未加药对照组肺癌A549细胞中,MGMT基因呈完全甲基化状态,并表达缺失。3、5-aza-CdR单独作用后,MGMT基因表现为去甲基化,恢复表达;TSA作用后,MGMT基因不能去甲基化,也几乎不能恢复表达;先给予5-aza-CdR,再给予TSA作用后,MGMT基因表现为去甲基化,表达水平显著提高,且高于5-aza-dC和TSA单独作用组。结论:1、TSA能抑制体外培养的肺癌A549细胞生长。2、肺癌A549细胞中MGMT基因出现异常甲基化,可能是导致基因低水平表达,转录失活的主要原因。3、5-aza-CdR可逆转肿瘤抑制基因甲基化,恢复其表达。联合应用5-aza-CdR和TSA可产生协同效应,显著增强甲基化的肿瘤抑制基因的表达。为肺癌的生物学治疗提供一种新的思路。