兔作为一种动物模型，其ES细胞及其培养体系研究较少，本试验在借鉴其他动物ES细胞的研究基础上，探讨兔ES细胞体外分离培养的最优方案。本试验分别从胚胎处理方式、培养液成分及饲养层密度等方面对兔类ES细胞分离培养时的影响进行比较。试验结果如下：1.对兔囊胚进行不同方式处理。结果显示，所得不同状态的囊胚，其培养效果不同。不经处理的兔完整囊胚，体外培养8~9d才有贴壁现象，ICM不增殖。挑破透明带组，72h左右能够能够完全孵出并开始贴壁，并且在ICM形成率，及兔类ES细胞生长克隆率方面显著高于其他两组（P<0.05），最高传至7代。2.探讨超数排卵对家兔囊胚体外发育能力的影响，收集自然发情和超数排卵处理交配96h后兔囊胚，以小鼠成纤维细胞为饲养层进行培养，以自然发情交配所得兔囊胚为对照。结果显示超数排卵组囊胚贴壁率、ICM形成率、F1代形成率与自然发情组无显著差异（P>0.05）。兔超数排卵所获得的囊胚对其体外发育能力无显著影响。3.不同培养基对兔囊胚克隆、传代的影响，结果显示，三组囊胚均在培养72h左右开始贴壁，囊胚在含血清的培养基中囊胚贴壁率、ICM形成率和F1形成率均显著高于其他两组（P<0.05）；但在后续的传代过程中，血清与血清替代品等比例混合的培养基较好的维持兔类ES细胞的形态，传代数高。4.探讨小鼠胚胎成纤维细胞接种密度对兔类ES细胞分离培养影响，将兔囊胚分别接种到密度分别为10×103cm-2、20×103cm-2和40×103cm-2的饲养层上，结果显示接种于密度为20×103cm-2饲养层上形成的兔类ES细胞F1、F2代细胞克隆率均显著高于其他两组（P<0.05）传代效果最佳。5.对所得的兔类ES细胞进行鉴定，结果显示，碱性磷酸酶染色及Oct-4及Nanog免疫组化染色ES集落呈强阳性，提取ES细胞集落的RNA，经RT-PCR检测，得到与预期大小一致的目的片段。故在体外培养兔类ES细胞时，我们可以同时超数排卵方式获得足够的实验材料，培养过程中挑破囊胚透明带后，将其置于血清与血清替代品等比例混合的培养基，饲养层密度为20×103cm-2的饲养层上进行培养。