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诺如病毒( Norovirus,NV)是一种新生食源性病毒,牡蛎是其主要传播载体之一。但是到目前为止,NV在牡蛎不同组织的累积分布状况仍不清楚。所以,研究该病毒在牡蛎组织中的分布对于提高食源性病毒的检出率和保障人民生活的饮食安全具有重要的实际意义。
利用免疫组织化学和RT-PCR方法,对NV在牡蛎不同组织部位的累积分布进行系统研究。实验以NV基因组RNA为材料,成功克隆其主要衣壳蛋白(VPl)编码基因ORF2(EF535854);并获得ORF2外源表达蛋白。以纯化原核表达蛋白为抗原制备VP1的多克隆抗体和单克隆抗体。其中获得单克隆抗体细胞株5株,分别命名为12F4、12F8、11C6、10C10和7F12。在建立牡蛎动物模型的基础上,以NV临床腹泻样本为检测靶标,以VP1的单克隆抗体为标记物对病毒在牡蛎体内不同组织的分布情况进行免疫组织化学分析。结果发现,在牡蛎的鳃、胃肠、消化盲囊和外套膜上前纤毛等组织中都有NV的累积分布。
利用RT-PCR方法进行NV、甲型肝炎病毒和轮状病毒在市售牡蛎样本不同组织中分布的验证实验。在牡蛎实际样本中也得到与人工污染试验相同的结果,检出阳性率分别是鳃14.71%,胃肠13.97%、消化盲囊13.24%和外套膜上前纤毛2.21%。综上所述,鳃是牡蛎中NV等食源性病毒检测最理想的靶位点,为污染贝类的食源性病毒检测积累了实验数据;为更好地评价贝类食源性病毒污染提供了新思路。