水稻第2号染色体深根比主效QTl-qRDR-2的精细定位

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水稻(Oryza sativa L.)是世界上重要的粮食作物之一,世界上有一半的人口以稻米为食。干旱是影响产量的重要非生物胁迫之一。近些年,我国城镇化进程的加快,更是加剧了我国水资源的短缺,因此,研究节水抗旱稻至关重要。根系是水稻重要的吸水器官,较深的根系分布层可以增加水稻的吸水量,提高水稻的避旱性。对控制深根比基因的精细定位,能够帮助我们揭示抗旱机理,加快节水抗旱稻选育进程,同时对保障我国粮食安全也具有重要意义。  本实验室自2004年以来利用珍汕97B与IRAT109构建重组自交系(RecombinantInbred Lines,RIL)群体,并利用213个SSR分子标记构建了覆盖全基因组的图谱。通过多年多点鉴定,共检测到四个深根比主效QTL,分别位于第1、2、4、7号染色体。通过回交,结合目标QTL连锁标记前景选择和全基因组背景选择,构建以珍汕97B为背景,含有目标QTL的4个近等基因系(Near Isogenic Line,NIL)。在此基础上,本文针对位于第2号染色体上深根比主效QTL-qRDR-2进行了精细定位,结果如下:  1.BC4F1前景与背景检测:本实验室于2015年春,完成含有目标QTL-qRDR-2的BC4F1构建,结合前景连锁标记及背景标记基因型检测,选择目标区段连锁标记基因型双杂合,背景与珍汕97B尽量相似单株,在63个BC4F1中共筛选出32个单株。  2.qRDR-2重组交换单株的筛选及重组交换位置的确定:将含有目的片段的近等基因系BC4F1发展为含有8000株的BC4F2群体,利用初定位区间两侧连锁标记RM6与RM240进行重组交换单株的筛选,共筛选出289株重组交换单株。通过分析重组交换单株目标区段标记基因型,发现其中14个标记发生重组,包括22个重组交换单株。  3.qRDR-2精细定位:本课题于2016年6月,将22个重组交换单株的自交后代种植于上海金山廊下基地,每个重组交换单株种植42个BC4F3单株。利用“篮子法”对每个单株进行表型鉴定,并结合基因型检测,将QTL-qRDR-2定位于分子标记Q2-323与Q2-12之间,物理距离为570kb。  4.第二次重组交换单株的筛选及重组交换位置的确定:为了进一步缩小区间距离,在第一次定位的基础上,利用QTL区间两侧连锁标记Q2-323与Q2-12,从4000个F4单株中,筛选出106个重组交换单株。通过分析重组交换单株目标区段标记基因型,发现其中6个标记发生重组,共包括12个重组交换单株。  5.候选基因预测:通过生物信息学分析,并结合本实验室根尖RNA-seq数据,在目标区段预7个候选基因:LOC_Os02g48360、LOC_Os02g48710、LOC_Os02g48770、LOC_Os02g49160、LOC_Os02g49440、LOC_Os02g49460、LOC_Os02g49720,其中LOC_OS02g49160为已知基因OsPIN1。
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