疼痛是一种因组织损伤或潜在的组织损伤而产生的痛苦感觉，常伴有不偷快的情绪或心血管和呼吸方面的变化。吗啡作为世界卫生组织推荐地癌症治疗中第三阶梯镇痛用药，已被证实可以有效缓解癌痛。除了已知的在神经元激活阿片受体信号能产生强烈的镇痛作用以外，大量的研究表明吗啡产生许多不依赖其镇痛作用的生物学效应并可能会影响细胞存活或增殖。近年来，随着人们对细胞凋亡在疾病的发生发展中的认识，阿片类药物对细胞凋亡的调节作用也有了不断的深入研究。　　 细胞凋亡已经被认识到是一种特征性的，重要的程序性细胞死亡(programmed cell death)模式，是为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程。细胞凋亡的机制包含了一连串能量依赖级联分子事件。Caspases是细胞凋亡的核心。普遍认为caspase-3是细胞凋亡蛋白酶级联反应的必经之路。影响细胞凋亡的蛋白Bcl-2、c-Myc、p53、Rb和生长因子(TGFβ、TNF)、NF-κB、药物等均可通过caspases的活化发挥作用。活性氧介质(reactiveoxygen species，ROS)在氧代谢过程中产生极强的氧化作用，通过连锁和增殖反应与各种细胞成份(膜磷脂.蛋白，核酸)发生反应，造成损伤，也在凋亡过程中发挥重要的作用。凋亡在传统上被认为是一个不可逆的过程，然而近期的许多研究显示在P53诱导的细胞凋亡早期，DNA修复过程被激活，在某些情况下，这种DNA修复过程可能涉及逆转细胞死亡通路的作用。　　 顺铂是一种细胞周期非特异性抗肿瘤药物，它通过与DNA链结合，形成交叉联接，抑制DNA和RNA合成和细胞有丝分裂，从而抑制肿瘤生长，该药已用于多种实体肿瘤的治疗，是目前较为有效的化疗药物之一。顺铂造成细胞死亡的形式主要是凋亡。顺铂-DNA的加合物的存在触发了DNA修复缺陷细胞凋亡的发生，并可使细胞周期停滞在G1、S或G2-M期。活性氧水平的升高也和顺铂诱导细胞凋亡的作用密切相关。吗啡是中重度癌痛上痛的代表用药，在中枢神经系统吗啡通过特定的受体发挥止痛，耐受和成瘾等神经心理作用。长期以来，对阿片受体信号的研究集中在经典的腺昔酸环化酶/cAMP/蛋白激酶A(PKA)途径。最近，有研究发现一些可能的鸦片类药物在非神经元组织的作用，例如吗啡通过μβ受体激活NO途径，作用于血管内皮细胞导致血管扩张；也可以在非内皮细胞，通过激活MAPK/ERK信号传导通路促进细胞增殖；甚至也有学者研究认为吗啡可以通过促血管生成而促进肿瘤的生长；同时也有学者研究认为吗啡促进许多种肿瘤细胞的凋亡。但是在应用化疗药物的肿瘤治疗过程中，吗啡是否仍然具有这些作用以及这些作用是否会对肿瘤化疗效果产生影响也成为关注的焦点。　　 顺铂和吗啡均广泛应用于癌症患者，二者共同用药的机会非常大。但是有关吗啡对顺铂化疗作用可能的影响的相关研究尚比较少，本研究旨在利用鼻咽癌CNE-2细胞作为载体，对吗啡是否会对顺铂诱导的细胞凋亡的作用产生影响，及可能的机制做一初步探讨。　　 第一章吗啡对顺铂诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的影响的体外实验研究　　 目的：本研究以对顺铂化疗敏感的鼻咽癌CNE-2细胞为载体进行体外实验，探讨作为阿片类药物的代表药物—吗啡对顺铂引起的肿瘤细胞凋亡的影响及可能的机制。　　 方法：人鼻咽癌细胞株CNE-2于含10％胎牛血清、100μg/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM培养液中，置于37℃、CO2分压为5％、湿度85％的恒温培养箱中培养，取对数生长期细胞进行实验。MTT法检测顺铂或顺铂联合不同浓度吗啡处理后的CNE-2细胞在24h、48h、72h的增殖。采用Annexin-V/PI双染的方法，经流式细胞仪检测不同浓度的吗啡对顺铂诱导的CNE-2细胞凋亡的影响。采用Western Blot免疫蛋白印迹实验来检测顺铂单独、吗啡1μg/ml联合顺铂和吗啡1000μg/ml联合顺铂72h后，Bax，Bcl-2，Caspase-3蛋白表达的变化。采用DCFH-DA作为荧光探针，应用流式细胞仪来检测顺铂单独、吗啡1μg/ml联合顺铂和吗啡1000μg/ml联合顺铂处理后细胞内ROS的变化。　　 结论：吗啡1μg/ml的预处理明显抑制了顺铂4μg/ml抑制CNE-2细胞的增殖和促进其凋亡的作用，而吗啡1000μg/ml的预处理协同了顺铂4μg/ml抑制CNE-2细胞的增殖和促进其凋亡的作用。　　 第二章吗啡对顺铂诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的影响的体内实验研究　　 目的：本研究旨在初步探讨吗啡对顺铂诱导的CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型的生长抑制作用的影响及可能的机制。　　 方法：BALB/C裸鼠，共20只，随机分为4组。包括A组：对照组，B组：顺铂治疗组(3mg/kg)，C组：吗啡用药组(5mg/kg)，D组：吗啡(5mg/kg)联合顺铂(3mg/kg)用药组。将稀释的CNE-2细胞皮下接种于裸鼠腋下。在接种细胞的第3天开始药物干预。由皮下接种肿瘤开始，隔天测量肿瘤的体积大小、裸鼠体重，观察裸鼠有无恶液质的山现。连续14天后，结束实验，颈椎断颈法处死所有裸鼠，完整分离每只裸鼠的肿瘤，称取肿瘤重量并记录。石蜡包埋，选择最大横切面5μm切片，常规HE染色，观察镜下肿瘤组织的病理特点。石蜡切片进行TUNEL染色，来证实顺铂在体内诱导瘤组织发生凋亡，以及吗啡对顺铂的这个作用的影响。同时石蜡切片进行免疫组化染色，来检测Bcl-2、Bax蛋白和cleaved-caspase-3蛋白在各组瘤组织内的表达量的变化以及血管内皮标志物CD34的表达量。　　 结论：吗啡5mg/kg在体内抑制顺铂诱导的CNE-2裸鼠移植瘤组织发生凋亡，抑制顺铂引起的Bcl-2/Bax的变化和caspase-3的活化并拮抗顺铂对肿瘤血管生成的抑制作用。