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目的:急性肺损伤(ALI)是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性进行性呼吸衰竭,其严重阶段称为急性呼吸窘迫综合征(ARDS),迄今尚无有效的治疗措施,病死率高达30—60%。在肺组织中,数量庞大的肺实质细胞如肺微血管内皮细胞(pulmonary microvaseular endothelial cell, PMVEC)不仅是炎性细胞和炎性介质作用的靶细胞,而且也是活跃的炎症细胞和效应细胞,对急性肺损伤的发生、发展,起着不可忽视的作用。由于肺微血管内皮细胞难于分离培养,以往研究肺血管内皮细胞功能常用较易培养的肺动脉内皮细胞甚至脐静脉内皮细胞来代替,但是肺微血管内皮细胞在形态上与大血管内皮细胞相似,生物学特性方面却不尽相同,不能相互替代,因而,体外成功培养PMVEC是研究PMVEC在ALI/ARDS发病作用的基础。羟乙基淀粉130/0.4(hydroxyethyl starch,HES)是最新一代羟乙基淀粉,已广泛应用于各种手术患者的容量替代治疗。HES130/0.4除容量治疗作用外,有研究表明其还有抗炎作用。本研究旨在从离体角度,探讨羟乙基淀粉130/0.4对LPS诱导的PMVEC炎性损伤是否具有影响。方法:1 PMVEC的培养30-50g的SD大鼠,戊巴比妥钠全身麻醉后,75%的酒精浸泡消毒,开胸取肺,PBS液进行肺灌洗,去除肺内残留血液,小心将肺脏边缘组织剪成1mm3大小的组织小块,贴入无菌的培养瓶内,将培养箱固化2h,加入DMEM培养液进行PMVEC的原代培养,当细胞融合后,经胰蛋白酶消化后进行传代培养,应用和第三代PMVEC进行本研究。2 HES对LPS刺激PMVEC细胞因子TNF-α、IL-6的影响将大鼠PMVEC悬液浓度调整到1×105个/ml, 48孔细胞培养板中每孔加入1ml细胞悬液,共36孔。将其随机分为9组(n=4),按处理因素的不同分为:LPS组、LPS+HES组和正常对照组。每一个处理组内,按照PMVEC孵育时间的不同,分为2、6、12h,3个亚组。LPS组加1μg/ml的LPS, LPS+HES组加入1μg/ml的LPS和30mg/ml的羟乙基淀粉130/0.4。正常对照组加入等体积的PBS液。将细胞培养板置于CO2细胞培养箱中(37℃、湿度100%、体积分数5% CO2),分别孵育2、6、12h后取出培养板,收集上清,ELISA检测细胞因子TNF-α、IL-6的含量。结果:1 PMVEC的原代培养在本研究中成功建立了PMVEC原代培养的方法。分离的PMVEC呈扁平的梭形或多角形,大小均匀,呈现明显的铺路石样,并有接触抑制现象。PMVECⅧ因子相关抗原里阳性表达,证明培养细胞为PMVEC。2 HES130/0.4对LPS刺激PMVEC细胞因子TNF-α、IL-6的影响2.1 LPS作用于PMVECS可使其分泌促炎细胞因子TNF-α、IL-6明显增加,2h、6h和12h三个时间点均显著增加,并呈时间依赖性,TNF-α、IL-6分泌的水平随时间的延长进行性上升。2.2 HES与LPS共培养PMVEC时可使LPS诱导的上述细胞因子的分泌水平在各时间点显著下降。结论:1本实验采用改良组织块培养法进行肺微血管内皮细胞的培养,成功建立了PMVEC的原代培养技术。2羟乙基淀粉130/0.4能够明显降低LPS刺激PMVEC后细胞因子TNF-α、IL-6分泌的水平,显示出HES的抗炎效应;