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目的:1.探讨建立稳定的大鼠肝移植(liver transplantation)动物模型的方法和手术技巧,为进一步的实验提供能够长期存活的稳定的肝移植动物模型。2.观察牛磺酸预处理后Sprague-Dawley(SD)大鼠移植肝脏的转氨酶,Kupffer细胞(KCs)的白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)及下游信号转导的关键核因子NF-κB表达水平,KCs上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量和移植肝脏的病理表现的变化,探讨牛磺酸预处理抑制肝脏缺血再灌注损害(IRI)的相关机制。方法:1.采用稍加改良的Kamada“二袖套法”建立大鼠原位肝移植动物模型,即采用端-端连续缝合法吻合肝上下腔静脉,用二袖套法吻合门静脉及肝下下腔静脉,胆总管用内支架法完成胆道重建,肝动脉结扎不予重建。术后观察大鼠的存活率和生存质量,总结手术技巧、经验和方法,掌握成熟稳定的大鼠原位肝移植动物模型技术。2.雄性SD大鼠128只,完全随机化分为生理盐水对照组(NS组)和牛磺酸预处理组(Tau组),采用上述方法建立肝移植动物模型。NS组切取供肝前10 min经腰静脉注射生理盐水1.5 ml;Tau组切取供肝前10 min经腰静脉注射牛磺酸(300 mmol/L)1.5 ml。于再灌注后0、60 min及180 min,分别活杀8只取外周血浆和分离培养再灌注后KCs,采用蛋白免疫印记法(Western blotting)及实时荧光定量PCR(real-time fluorogenetie quantitative PCR)测定KCs中的IRAK-4蛋白和mRNA表达水平;凝胶电泳迁移率分析法(EMSA)检测KCs的NF-κB活性;酶连免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测培养上清液中TNF-α含量;全自动血清自动生物化学仪检测血清转氨酶。另每组留8只术后大鼠观察1w生存情况,并处死存活7d的大鼠取肝脏标本光镜切片HE染色检测组织形态学改变。结果:1.通过手术操作训练,建立起稳定的大鼠原位肝移植实验模型。NS组和Tau组两组间手术时间、供肝冷保存时间、受体无肝期时间相比无显著差异。2.血清ALT、AST检测:NS、Tau组间相比较,NS组血清ALT术后60 min和180 min分别为652.88±162.76 U/L和986.25±173.59 U/L ,血清AST术后60 min和180 min分别为1578.0±369.64 U/L和2125.3±303.46 U/L;Tau组术后60 min和180 min血清ALT分别为434.25±112.27 U/L和535.375±183.23 U/L,Tau组术后60 min和180 min血清AST分别为1088.38±258.73 U/L和1201.63±298.67 U/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05);0 min时相点比较两组无显著性差异。3. KCs中IRAK-4 mRNA和蛋白表达量的变化:NS组KCs中IRAK-4 mRNA和蛋白表达量在60 min、180 min分别为5.44±1.04、3.95±0.98和3.52±0.81、3.26±0.62;Tau组KCs中IRAK-4 mRNA和蛋白表达量在60 min、180 min分别为2.39±1.11、1.53±0.48和1.67±0.37、1.49±0.19;Tau组术后60 min和180 min的IRAK-4 mRNA和蛋白表达量均明显低于NS组术后同一时相点,两组间差异有统计学意义(P<0.05),而0 min时相点则无显著性差异。4. KCs中NF-κB表达水平的变化:NS组NF-κB在术后60 min、180 min分别为530.19±53.24和449.87±41.58;Tau组NF-κB在术后60 min、180 min分别为333.96±36.43和279.69±35.49,Tau组术后60 min和180 min KCs中NF-κB表达水平均明显低于NS组术后同一时相点,两组间差异有统计学意义(P<0.05),而0 min时相点则无显著性差异。5. KCs培养上清液中TNF-α的含量变化:NS组TNF-α的含量于60 min和180 min分别为1349.27±189.67μg/L和398.61±43.28μg/L;Tau组TNF-α的含量于60 min和180 min分别为674.18±85.32μg/L和43.28±9.78μg/L,NS组与Tau组在术后60 min和180 min比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.牛磺酸预处理能够有效地减轻肝移植大鼠血清ALT和AST,起到有效地抑制移植肝脏的缺血再灌注损伤的作用。2.牛磺酸预处理可通过IRAK-4途径抑制移植肝脏KCs的激活,随之引起下游关键炎症因子NF-κB、TNF-α等产生明显减少,从而明显减轻移植肝脏的IRI。因此,牛磺酸预处理抑制KCs的IRAK-4信号传导通路的激活是牛磺酸减轻肝移植IRI的重要机制之一。