胰酶是从猪、牛、羊等胰脏中提取的多种酶的混合物,是我国生化制药行业的重要产品之一。本论文研究了絮凝法沉淀分离胰酶。通过实验,筛选出了具有良好絮凝效果的絮凝剂——壳聚糖。探讨了壳聚糖用量、pH值、温度等因素对絮凝作用的影响,并比较了絮凝胰酶和丙酮胰酶性质的差异。 壳聚糖的用量、pH值和温度对絮凝有明显的影响。增加壳聚糖的用量有利于絮凝沉淀,但是会造成胰酶比酶活的下降,实验表明壳聚糖的适宜用量为0.045g/g蛋白;在pH5～6范围内,絮凝效果好,胰酶比酶活相对较高:升高温度有利于絮凝但会造成酶活损失,故一般选择在20℃左右操作。 用欧洲药店标准Ⅳ方法测定絮凝胰酶的比酶活,结果为蛋白酶1307U/g、脂肪酶74.65kU/g、淀粉酶12.9kU/g,酶活收率分别为:18.0%、36.6%和7.0%。其中蛋白酶和淀粉酶的活力较低,与丙酮胰酶(3159U/g和58.7kU/g)相比有较大的差距,但是脂肪酶活力较高,高于丙酮胰酶的50.10kU/g。测定絮凝沉淀胰酶滤液的酶活,结果滤液中酶活所占的比率很低,说明絮凝沉淀比较有效。 经测定,絮凝胰酶的热稳定性显著增强,最适温度比丙酮胰酶提高10℃;最适pH值向酸性方向移动,对酸性环境的稳定性增加;表观米氏常数K_m有所增加。说明壳聚糖对胰酶有固定化作用。