啤酒花矮化类病毒寄主适应性和致病性研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lanaya0903
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啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid, HSVd)是啤酒花矮化类病毒属(Hostnviroid)的唯一成员,其寄主范围广泛,能够侵染葡萄、啤酒花和核果类果树并引起一些严重危害作物生产的病害如:啤酒花矮化病,桃、李斑果病等。虽然从2006年开始,已经有HSVd在我国杏、桃和葡萄等不同寄主上发生的零星报道,但是对HSVd的发生、分布、遗传变异、传播规律、寄主适应性和致病性变化等问题尚未进行系统的研究。因此,本研究旨在系统解答上述问题。首先,构建了多聚探针,建立了使用斑点杂交同时检测4种侵染葡萄的类病毒:HSVd、澳大利亚葡萄类病毒(Australian grapevine viroid, AGVd)、葡萄黄痘类病毒1和2(Grapevine yellowspeckle viroid-1and2, GYSVd-1and2)的技术体系。通过亚克隆的方法将这4种类病毒的全长cDNA顺次连接到同一个载体上构建出重组质粒后,体外转录出多聚cRNA探针。该探针与单一类病毒的探针具有相似的检测灵敏度。此外,还将CTAB法提取葡萄RNA的方法应用于多聚探针的检测,从而建立了一种快速、灵敏且低成本的葡萄类病毒检测技术体系。该体系可以被广泛应用于植物检验、检疫和脱毒材料的筛选等方面。其次,应用建立的快速检测技术体系并且结合斑点杂交检测调查了HSVd在中国的发生、分布;使用RT-PCR、克隆和测序的方法分析了HSVd中国分离物的遗传变异。从17省市共采集了553个样品,在来自于6种寄主(葡萄、啤酒花、桃、李、杏、巴旦杏)上的127个样品中检测到了HSVd,平均感染率为23%。序列分析发现:1)从采自不同地区,不同寄主的样品上可以获得序列完全一致的变体,表明不同寄主间可能存在交叉传播。2)中国HSVd的葡萄、啤酒花和核果类分离物主要属于Hop组和Plum组,但是,分离于葡萄的两个变体HSVd.apr50和HSVd.apr57不能被划入任何一个已知的组内,而是和HSVd.apr35形成一个新的由已知的组通过重组形成的组。3) HSVd.g38是目前为止已知的唯一一个被划分到Plum组的从葡萄中分离出的变体。这不仅表明了葡萄分离物的明显异质性,而且暗示了HSVd在葡萄和核果类果树间可能也存在交叉传播。最后,构建了HSVd的葡萄株系KY04及其在啤酒花上经过适应进化后而产生的新株系KFKi的侵染性克隆。通过单独和混合接种葡萄、啤酒花和黄瓜,比较了这两个株系的侵染性、致病性和复制能力。发现:1)变体KFKi不能够在葡萄中稳定复制,而是回复突变为KY04。表明HSVd的适应性进化具有寄主的特异性。2)无论在啤酒花还是在黄瓜上,KFKi的侵染性、复制能力和致病性均低于KY04,这说明侵染性、复制能力和致病性的降低并不影响KFKi生存优势的增强。暗示HSVd在进化中遵循“trade-off”的原则。3)在热变性过程中,KFKi的二级结构的稳定性低于KY04。4) KY04侵染啤酒花后产生的sRNA的量明显多于KFKi。这说明HSVd在适应性进化前受到的来自于寄主基因沉默作用的选择压力大于进化后变体所受到的选择压力。为拮抗基因沉默介导的寄主防卫反应,类病毒在长期的进化中演变出了严紧的二级结构。我们的研究为这一假设提供了具体的证据。5) HSVd-sRNA在基因组上呈现不均衡分布,且基因组上存在一些特定的产生sRNA的热点区域。比较发现:同一种类病毒在不同寄主上所产生的sRNA在基因组上的分布并不相同。这表明类病毒sRNA的产生受寄主的影响。
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