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目的 骨肉瘤(成骨肉瘤)是最为常见的恶性骨肿瘤，恶性程度极高，预后很差。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand，TRAIL)是肿瘤坏死因子(Tumour necrosis factor，TNF)家族的成员，体外实验表明：TRAIL可诱导多种组织来源的肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞却没有明显毒性。但有一些肿瘤细胞，如一些乳腺癌、膀胱癌、结肠癌细胞等对TRAIL没有反应。有研究表明采用药物干预的方法，能提高TRAIL诱导肿瘤细胞的凋亡作用。本研究以骨肉瘤OS-732细胞为模型，观察TRAIL和化疗药甲氨喋呤(Methotrexate，MTX)、阿霉素(Doxorubicin，DOX)、顺铂(Cisplatin，CDDP)诱导OS-732细胞发生凋亡的现象，以及TRAIL与不同化疗药的协同关系，以求获得克服肿瘤细胞耐药、且减少系统毒副作用的证据，为TRAIL的临床应用提供依据。 方法 人骨肉瘤OS-732细胞常规培养，待细胞处于指数生长期时，施加实验因素：不同浓度的甲氨喋呤(Methotrexate，MTX)、阿霉素(Doxorubicin，DOX)、顺铂(Cisplatin，CDDP)或将化疗药与TRAIL联用24h及48h，采用MTT法测试药物的细胞毒性作用，应用流式细胞术检测细胞凋亡比例，并分别在倒置相差显微镜、扫描及透射电镜下进行形态学观察。试验重复3次，试验数据以平均值±标准差表示，数据分析用SPSS统计分析软件，组间对比采用t检验，P＜0.05认为差异显著。 实验结果 1．MTT还原实验结果：骨肉瘤OS-732细胞对TRAIL不是十分敏感，100ng／ml的TRAIL在作用24h后的抑制率为24.44％。细胞对DOX和CDDP相对敏感，并存在剂量依赖性细胞毒效应，但对MTX的敏感性较差。TRAIL(100n扩Inl)与DOX或CDDP(IPPC)联合应用24h后，肿瘤抑制率明显增加，分别达到58.36%和54.10%，而药物或TRAIL单用时细胞凋亡均不超过25%。但将TRAIL与M仪联合应用时，肿瘤抑制率没有明显增加，与单用T以IL相比差异不显著(P>0.05)。 2.流式细胞仪检测结果:05一732细胞经不同药物处理后，均在二倍体峰前出现亚Gl峰(凋亡峰)。各种药物单独应用时凋亡峰的峰值均未超过25%，当TKAIL与DOX或CDDP联合应用后，其峰值有明显增加，分别是60 .88%和53 .29%，说明这两种化疗药能增强TRAIL的抗肿瘤疗效。但当TRAIL与MTX联合应用时则凋亡峰峰值没有明显增加，说明MTX可能不会增强TRAIL的抗肿瘤疗效，这与MTr的结果相同。 3.细胞形态学观察结果:倒置相差显微镜观察，T以IL(IOOn群而)及DOX(o·6林扩ml)单独作用于细胞48h后，部分细胞变小、变圆，细胞膜完整。两者合用时见大量细胞脱落悬浮于培养液中。电镜下观察，骨肉瘤05一732细胞与TRAIL(500n岁耐)共同孵育48h后，可见核染色质浓集及凋亡小体。结论1.骨肉瘤05一732细胞对TRAIL不是十分敏感。2.DOX与CDDP大大增强了骨肉瘤05一732细胞对TRAIL的敏感性。3.TRAIL与MTX合用后对杀灭骨肉瘤05一732细胞没有协同作用。