论文部分内容阅读
背景：MicroRNA是一类非编码RNA,在转录水平负性调控基因表达, microRNA几乎参与调节细胞的每个生物过程。在肺癌组织中miRNAs有特定的表达谱,参与细胞凋亡、调节肿瘤血管生成等多个过程,并可作为生物标志物用以进行早期诊断及判断预后。方法：本研究检测了14种细胞系中miR-888，miR-892b，miR-550a，miR-34a的基础表达量，并给4种肺癌细胞系进行miR-888，miR-892b，miR-550a，miR-34a转染，观察转染后细胞的生长曲线。本研究还对41例经EGFR-TKI治疗的非小细胞肺癌福尔马林固定石蜡包埋组织进行了miR-888，miR-892b，miR-550a，miR-34a，miR-30b, miR-30c, miR-221, miR-222, miR-103和miR-203表达的检测。分析miRNAs表达量和临床疗效及患者生存之间的关系。结果：MiRNAs基础表达量的测定结果显示：肺癌细胞系和HBE细胞中miR-888表达无区别；除H1299细胞中miR-892b表达明显高于HBE细胞外，其他8种肺癌细胞的miR-892b表达量低于HBE细胞（P=0.023）；肺癌细胞中miR-550a表达量高于HBE细胞，未见统计学差异（P=0.083）；肺癌细胞中miR34a表达量低于HBE细胞，但是未见到明显统计学差异（P=0.062）。慢病毒包被的Hsa-miRs转染成功率高，GFP表达稳定，经传代10代以上仍有稳定的GFP表达，miRNAs的表达量均有显著增加。不同细胞系转染不同Hsa-RNAs后对细胞的生长曲线有不同影响。在肺癌组织标本检测中，我们发现miRNA-203的表达量与患者的性别相关（P=0.024），与其他临床病理特征无显著相关。其它7种miRNAs表达量与临床病理特征不相关。MiR-30b和miR-30c的表达量与TKI近期有效率和疾病控制率有关，但是与TKIs一线治疗的PFS无关。经TKIs一线治疗，miR-203高表达组PFS优于miR-203低表达组。Kaplan-Meier曲线分析提示MiR-30b、miR-30c、miR-103a高表达组总生存优于低表达组（P=0.013，0.006和0.038）。结论：MiRNAs表达具有细胞和组织特异性，转染miRNAs可以影响细胞的生物学特性。在肺癌石蜡组织标本进行miRNAs检测稳定性好，结果可靠。MiR-30b、miR-30c、miR-103a表达量可以用于判断NSCLC患者的预后。MiR-30b和miR-30c还可用于NSCLC患者TKIs治疗的预测。目的：研究中国非小细胞肺癌患者中EGFR、K-Ras和B-Raf的突变情况，及其与临床病理特征，临床疗效之间的相关性，及在肺癌预后中的价值。方法：应用x-TAG液相芯片技术回顾性研究北京胸科医院2006年3月至2011年5月间126例应用EGFR-TKIs治疗的NSCLC患者的EGFR、K-Ras及B-Raf的突变状况，基因突变与临床特征，预后及疗效之间的相关性。结果：126例非选择性非小细胞肺癌患者中，共检测到49例患者存在EGFR敏感突变，突变率38.9%。所有突变均为单位点突变，未见多位点突变，没有检测到Exon20突变。肺腺癌和支气管肺泡细胞癌突变率高于肺鳞癌。女性突变率高于男性(P=0.042)，不吸烟患者突变率高于吸烟和曾吸烟患者(P=0.044)。EGFR突变患者总生存优于EGFR阴性的患者（P=0.169)， EGFR突变患者一线TKI治疗的反应率优于EGFR阴性的患者，但未见到统计学差异（P=0.159)。在经K-Ras检测的100例患者中，检测到10例（10.0%）患者存在K-Ras突变，共检测出6种K-Ras突变，分别为：K-Ras codon12G12R突变1例；K-Rascodon12G12V突变3例；K-Ras codon12G12C突变1例；K-Ras codon13G13D突变2例；K-Ras codon61Q61H突变2例；K-Ras codon61Q61L突变1例；未发现多位点突变患者。其中有四例患者同时存在EGFR突变和K-Ras突变。未发现性别、年龄、病理类型、吸烟史等临床病理特征与K-Ras突变存在相关性。Kaplan-Meier曲线分析发现，K-Ras突变患者的总生存时间比不存在K-Ras突变患者的总生存时间短，两者之间未发现具有统计学差异。在经B-Raf检测的110例患者中检测到10例（9.1%）患者存在B-Raf突变，检测出1种B-Raf突变，为：B-Raf Exon15codon600V600E突变。未发现B-Raf突变与临床病理特征之间的相关性。结论：本研究所纳入非小细胞肺癌患者的EGFR突变率与既往报道的亚洲人群EGFR突变率相似，高于欧美国家人群的EGFR突变率。EGFR突变率与性别、吸烟史、病理类型等临床特征相关，存在EGFR敏感突变的人群具有较好的疾病控制率和较长的生存。K-Ras突变患者对一线治疗的反应及总生存均差于K-Ras突变阴性的患者。B-Raf突变率较低，突变状态与临床病理特征不相关。本研究所用x-TAG液相芯片技术可以实现搞通量检测，易于临床推广。