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目的:建立一种能同时定量检测全血干血斑中维生素B1、B2、B6（VitB1、VitB2、VitB6）含量的高效液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）方法,完成系统的方法学确证。分析及比较北京和西宁地区两所医院140例07岁儿童全血中维生素B1（硫铵素）、维生素B2（核黄素）、维生素B6（磷酸吡哆醛）的营养状况,以期为两地儿童保健工作提供现实依据。方法:应用ACE5 C8色谱柱分离3种目标待测物,电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测模式,优化质谱参数及流动相条件,实现5分钟内分离3种目标维生素。依据美国食品药品监督管理局标准（Food and Drug Administration,FDA）对分析方法确证要求,系统考察了该方法线性范围、灵敏度、准确度、精密度、回收率、稳定性,以及固态干血斑与同源液态全血中目标维生素检测值一致性。系统方法学确证完成后,随机选取2016年8月在首都儿科研究所、青海省妇女儿童医院门诊就诊,排除营养元素缺乏及罹患血液系统疾病的07岁140例儿童为研究对象,其中北京地区72例,西宁地区68例;采集末梢全血40μL制备成全血干血斑。应用上述经过系统方法学考评的定量方法对2个地区儿童的干血斑中3种B族维生素水平进行定量分析和比较。结果:VitB1、VitB2、VitB6线性范围分别为0.5100 ng/ml,0.240 ng/ml,0.5100 ng/ml。最低定量限分别为0.5,0.2,0.5 ng/mL。准确度（RE%）分别为-5.99%0.97%,-5.15%1.33%,-7.55%5.47%。批内精密度分别为3.22%8.26%,1.64%1.30%,1.72%7.53%。批间精密度分别为0.29%13.11%,0.19%8.49%,0.50%10.80%。加标回收率分别为97.65%111.15%,98.37%103.3,80.67%90.50%。VitB1、VitB2、VitB6在室温存放30天内的8次重复检测中,检测值相对标准偏差小于15%,表明干血斑中3种待测B族维生素在室温条件下维持稳定。应用该方法检测北京与西宁两所医院140例受检儿童全血VitB1、VitB2、VitB6水平,结果表明北京地区医院儿童全血中VitB2（核黄素）水平显著高于西宁地区医院儿童（t=4.89,P<0.05）。在全部受检儿童中,幼儿组儿童全血中VitB1（硫铵素）和VitB2（核黄素）水平高于学龄前组及婴儿组（H=14.41,P<0.05;F=9.84,P<0.05）。结论:运用干血片采样（DBS）结合高效液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）建立了一种能同时定量检测全血中VitB1、VitB2、VitB6的方法。该方法可准确定量儿童三种B族维生素水平。应用该方法检测北京与西宁两地140例7岁以下儿童,结果表明,北京地区医院儿童VitB2（核黄素）水平高于同年龄段西宁地区医院儿童。在全部受检儿童中,幼儿组全血中含量VitB1（硫铵素）和VitB2（核黄素）水平高于婴儿组与学龄前组。