【摘 要】
：
磷酸二酯酶（PDE）通过介导c AMP水解来调节病原菌营养生长、产孢、萌发和致病性等。前期研究发现c AMP-PKA信号途径参与了梨果黑斑病菌Alternaria alternata感知果实表皮蜡质信号进而启动侵染的过程,但c AMP降解酶PDE基因对A.alternata侵染结构分化的调控机制尚需进一步揭示。本文在对A.alternata PDEs基因克隆、生物信息学和基因表达模式分析的基础上,
论文部分内容阅读
磷酸二酯酶（PDE）通过介导c AMP水解来调节病原菌营养生长、产孢、萌发和致病性等。前期研究发现c AMP-PKA信号途径参与了梨果黑斑病菌Alternaria alternata感知果实表皮蜡质信号进而启动侵染的过程,但c AMP降解酶PDE基因对A.alternata侵染结构分化的调控机制尚需进一步揭示。本文在对A.alternata PDEs基因克隆、生物信息学和基因表达模式分析的基础上,通过分子生物学和药理学方法,系统研究了Aa PDEs基因对梨果表皮蜡质和疏水性诱导A.alternata侵染结构分化、生长发育、应激胁迫、黑色素合成和致病性的调控作用。主要研究结果如下:1.以玉米大斑病菌L-PDE和H-PDE的蛋白序列作为参考,在A.alternata基因组全序列数据库中进行BLAST比对,得到L-PDE和H-PDE的同源基因,分别命名为Aa PDEL和Aa PDEH,并从梨果黑斑病菌A.alternata中克隆得到Aa PDEL和Aa PDEH CDS区长度分别为3132 bp和2888 bp。生物信息学分析表明,Aa PDEL属于酸性蛋白,Aa PDEH属于碱性蛋白,均属于亲水性不稳定蛋白;Aa PDEL和Aa PDEH分别与小麦褐斑病菌（Pyrenophoratritici-repentis）和番茄匍柄霉（Stemphylium lycopersici）的同源性分别高达79.25%和88.8%;Aa PDEL具有Class II PDE保守催化结构域和翻译延长因子EF1G保守基序,Aa PDEH具有典型的Class I PDE保守催化结构域和金属依赖性磷酸二酯酶“HD”基序,分别定位于线粒体上和细胞核上。2.利用同源重组、PEG介导的原生质体转化法以及RT-q PCR技术验证获得基因缺失突变株ΔAa PDEL、ΔAa PDEH及回补菌株ΔAa PDEL-C和ΔAa PDEH-C。生物学功能分析表明,与野生型相比,ΔAa PDEL菌落直径显著降低,菌落颜色浅,在7 d时较野生型降低了14.3%,产孢量显著降低,低于野生型67.9%,而ΔAa PDEH菌落生长和产孢量无明显变化;ΔAa PDEL对渗透胁迫（Na CL）的较敏感,细胞壁合成抑制剂（Congo Red）对ΔAa PDEL抑制作用不明显,而对ΔAa PDEH具有显著的抑制作用。此外,Aa PDEL和Aa PDEH均正向调控黑色素的合成,其中Aa PDEL起着主要调控作用。3.在A.alternata侵染结构分化中c AMP含量呈上升趋势,同时梨果表皮物化信号诱导Aa PDEs基因上调。体外试验和洋葱表皮模拟体内试验发现涂有果蜡的疏水性表面能显著诱导A.alternata孢子萌发和附着胞的形成,而Aa PDEL和Aa PDEH的缺失会促进附着胞形成,其中Aa PDEL起主要调控作用。同时Aa PDEL和Aa PDEH的缺失提高了果皮蜡质诱导附着胞形成过程中的胞内c AMP含量。PDE抑制剂长春西汀处理进一步证实PDE参与了梨果皮蜡质和疏水性诱导A.alternata孢子萌发和附着胞形成过程。此外,ΔAa PDEL的侵染菌丝形成率和菌丝穿透能力降低,且在损伤接种的梨果上致病能力减弱,而ΔAa PDEH与对照差异不显著。综上所述,Aa PDEs对梨黑斑病菌A.alternata的生长、应激胁迫、致病性和黑色素合成中具有重要的调控作用,尤其发现Aa PDEs参与了梨果表皮物化信号诱导A.alternata侵染结构分化的过程。
其他文献
千粒重（Thousand grain wight,TGW）是决定小麦产量潜力的关键因素之一,属于多基因控制的复杂数量性状。深入解析TGW遗传基础,对小麦产量形成的分子遗传改良具有重要意义。本研究以1套重组自交系（Recombinant inbred line,RIL）群体为供试材料,对TGW进行多环境QTL定位和遗传解析。通过元分析,在全基因组水平上挖掘一致性主效QTL位点,筛选和鉴定控制小麦粒重
互感式位移传感器具有灵敏度高、结构简单、运行稳定等特点,在测量物体拉伸长度、厚度等方面发挥着重要作用。在实际工作中,该装置测量范围内存在非线性问题,严重影响其测量精度。为解决这一问题,研究人员基于信号处理电路,深入分析RVDT以及LVDT传感器结构,以及传感器差动输出电压值与传感器内部铁芯位移的线性变化规律,设计解调电路结构,扩大传感器线性范围,令互感式位移传感器在线性要求高、工作空间狭小的场景中
文中提出了一种可兼容四/五线制LVDT传感器信号调理电路。该电路的优势是不需更改硬件可对四/五线制LVDT传感器信号进行调理，将LVDT传感器位移比率信息转换为直流电压的幅值，幅值与比率成正比。该电路基于某集成LVDT调理芯片实现，通过五线制接口调理电路、四/五线制接口切换电路实现四/五线制LVDT传感器的兼容设计。并使用LVDT仿真板卡搭建了试验平台，完成了对该电路的验证，结果表明输出电压与LV
贯叶连翘（Hypericum perforatum L.）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物,地上部分所含金丝桃素（Hypericin,Hyp）具有显著抗抑郁、抗病毒和抗肿瘤等功效。研究表明,适宜低温可促进贯叶连翘生长和Hyp积累,但低温促进Hyp生物合成的分子机制报道较少,因此,本研究以不同温度（15和22℃）处理的贯叶连翘组培苗为材料,采用组织切片、HPLC和RNA-seq等技术和方法,分别对叶片
针对传统漆包线工艺制备的线性可变差动变压器（LVDT）位移传感器无法在高温环境下工作的问题，提出一种基于高温共烧陶瓷（HTCC）技术制备耐高温LVDT位移传感器敏感芯体的方法。按0～20 mm的量程范围要求，对敏感芯体进行合理优化后，所制备的敏感芯体测量精度可在±1%FS之内与仿真结果相符合。该制备方法在提升耐高温性能的同时可保证测量精度，具有一定的实际应用前景。
针对传统LVDT测量电路中高成本模块较多且性能不足的问题，提出并设计了一种基于振荡电路的LVDT测量系统。测量系统将LVDT线圈作为谐振电感接入高性能LC振荡器，利用其谐振信号的频移获得待测位移，借助谐振器数学模型及理论分析改善测量系统线性度。样机实验结果显示，在满位移状态下频率范围可达到73～122 kHz,采样速率和分辨率可根据实际需求进行调整，其最高分辨率可达到16.7 bits,实现亚微米
静宁烧鸡历史悠久、风味独特、营养价值高,深受广大消费者的青睐。它作为甘肃百年老字号,加工时采用老卤汤卤煮,卤制过程中老汤赋予鸡肉独特的色香味。由于加工时老汤重复使用,静宁烧鸡中可能会产生一定量的杂环胺（Heterocyclic aromatic amines,HAAs）。HAAs能够诱导人体发生氧化应激、细胞功能损害,最终使人体慢性疾病发生概率显著增加。目前,国内外对于静宁烧鸡中HAAs的检测、形
动物脂肪作为营养物质之一,可赋予肉制品良好的风味,并促进人体对脂溶性维生素的吸收,且因其具有较强的可塑性,可有效提高肉制品加工性能。然而,由于动物脂肪中的高饱和脂肪酸水平可能引发肥胖、冠心病及动脉粥样硬化等一系列慢性疾病,研发一类可替代动物脂肪的原料从而降低肉制品中饱和脂肪酸水平,保持产品原有风味和质地等品质特性成为目前低脂肉类产品研究的热点。本文研究了超高压技术辅助制备牛皮明胶及其在低脂牛肉饼中
多孔淀粉（Porous starch,PS）是一种新型改性淀粉,与天然淀粉（Native starch,NS）相比,拥有更大的比表面积和更高的吸附性能,且在后续反应中能暴露更多的反应位点从而提高反应效率。羧甲基淀粉（Carboxymethyl starch,CMS）因其良好的水溶性被广泛研究,但其较低的比表面积限制了后续应用。将氯乙酸钠（Sodium chloroacetate,SMCA）与PS通
LVDT传感器作为感知器件,在航空、航天等领域中发挥着重要的作用,其测量结果的准确性直接影响系统的控制与操作。随着系统中电子装备的增多,电子设备之间的电磁干扰影响愈发严重。LVDT激励信号以单频点、固定幅值的正弦信号为主,信号参数受外部影响时,传感器测量结果会出现偏差或错误。为了解决这些问题,提出了一种基于FPGA的产生、采集、测量和调整为一体的LVDT激励信号自稳定输出方案。经过仿真验证,当激励