【摘 要】
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本研究目的在于探索新几内亚凤仙(Impatients hawkeri)离体快繁的有效途径,以便建立快速高效的新几内亚凤仙组织培养技术体系。以带腋芽的茎段为主要外植体,通过不定芽发生来诱
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本研究目的在于探索新几内亚凤仙(Impatients hawkeri)离体快繁的有效途径,以便建立快速高效的新几内亚凤仙组织培养技术体系。以带腋芽的茎段为主要外植体,通过不定芽发生来诱导增殖;同时还利用茎段和叶片作为诱导愈伤组织的材料,然后通过诱导丛生芽的分化来增殖。试验以单因素和正交设计为主,对结果作方差分析及多重比较,确定了新几内亚凤仙组织培养的一系列技术参数组合,为其工厂化生产提供了一定的理论基础和技术支持,研究结果表明: (1)新几内亚凤仙离体培养适宜的外植体类型为新枝的上部带腋芽的茎段,其污染率低、分化出芽较快;(2)经过预处理的外植体用2.5%的次氯酸钠处理10~15分钟或用氯化汞处理5~7分钟均能达到很好的处理效果;(3)初代培养不定芽分化适宜的细胞分裂素和生长素分别为6-BA和NAA,6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1是诱导不定芽分化的最佳配比;(4)新几内亚凤仙在pH5.8~6.4的微酸条件下茎芽适宜分化,中性条件下茎芽的分化率很低;(5)MS培养基是继代增殖培养的最适培养基;(6)新几内亚凤仙增殖生长适宜的生长素和细胞分裂素为NAA和6-BA,此外,有机添加物对茎芽增殖也有一定的效果,6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+LH200mg·L-1的激素和有机添加物的配比对增殖生长效果较好;(7)继代周期45天左右,既可以保证茎芽增殖的数量,又可以保证增殖茎芽的质量;(8)蔗糖能显著提高增殖系数,适宜的蔗糖浓度范围为30~40g·L-1;(9)NAA和蔗糖的配合使用对茎芽的增高有显著的作用,NAA0.1mg·L-1+蔗糖5%对弱苗复壮效果最佳;(10)新几内亚凤仙试管苗很容易生根,不加任何激素的MS培养基即可诱导其生根,但是所生的根比较细弱,必须加入一定量的生长素才能提高根系的质量。MS+0.1mg·L-1IBA和1/4MS+0.5mg·L-1IBA两个处理,根的长度和粗度适中,毛细根数较多,比较适合生根培养;(11)炼苗天数以5~7天为宜,新几内亚凤仙初期移栽基质的选择,以通透性强的基质为适合的基质,纯蛭石的基质为最适合的移栽基质;(12)2,4-D0.2mg·L-1+6-BA0.1mg·L-1的激素配比可以保证愈伤组织的质量和愈伤组织的诱导率,是新几内亚凤仙诱导愈伤组织最适宜的激素配比;(13)采用暗培养条件下进行新几内亚凤仙叶片愈伤组织的诱导优于光培养和弱光培养;(14)刮伤外植体的处理方式能显著提早出愈时间,提高出愈率,但伴随着一定的褐化现象。刮伤处理较不刮伤处理有利于新几内亚凤仙愈伤组织的诱导;(15)在新几内亚凤仙的实际大规模组培生产中,可以用优级白砂糖或者绵白糖来代替蔗糖作为增殖生长阶段的碳源,用自来水代替蒸馏水,可以降低组培成本。
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