茅苍术提取物抗幽门螺杆菌及抗胃癌细胞作用机制初步研究

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茅苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.干燥根茎,具有燥湿健脾,祛风散寒,明目的功效。现代药理研究表明茅苍术具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗溃疡等作用。本论文研究了茅苍术提取物及不同极性部位对幽门螺杆菌(Hp)的抑制作用和对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞的增殖抑制作用及作用机制,并对其药效部位的化学成分进行了初步分析。为进一步研究茅苍术抗肿瘤药效物质基础及作用机制提供了基础性研究资料。主要研究内容和结论如下:  1、茅苍术水提物及不同极性部位对Hp生长的抑制作用研究。结果显示茅苍术水提物对Hp生长具有一定的抑制作用,其MIC50为8.45 mg·mL-1。比较了茅苍术水提物石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和萃余部位对Hp的抑制作用,抑菌作用大小顺序依次为:石油醚部位>乙酸乙酯部位>正丁醇部位,萃余部位基本没有抑菌作用。石油醚部位的MIC50为0.576 mg·mL-1;乙酸乙酯部位的MIC50为1.04 mg·mL-1;正丁醇部位的MIC50为1.49 mg·mL-1。其结果显示,石油醚部位为其主要药效部位。  2、茅苍术水提物对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的增殖抑制及作用机制初步研究。采用MTT法研究茅苍术水提物体外对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的增殖抑制作用。在作用时间为24 h,药物浓度为1 mg·mL-1时,对胃癌BGC-823和SGC-7901的抑制率分别达到73.5%和71.5%,IC50分别为2.93mg·mL-1和3.36 mg·mL-1;作用时间为48 h时,对胃癌BGC-823和SGC-7901的抑制率分别达到81.0%和81.6%,IC50分别为2.18 mg·mL-1和3.13 mg·mL-1。  Hoechst33342荧光染色结果显示,茅苍术水提物可以诱导胃癌细胞BGC-823和SGC-7901细胞凋亡。流式细胞仪检测细胞周期结果表明,茅苍术水提物可将BGC-823细胞阻滞于S期,阻滞SGC-7901细胞于G0/G1期。  3、茅苍术水提物的石油醚部位,乙酸乙酯部位,正丁醇不同极性部位对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的增殖抑制及作用机制初步研究。MTT实验结果显示茅苍术水提液的石油醚部位,乙酸乙酯部位和正丁醇部位均具有一定的抑制胃癌细胞增殖的作用,其中,石油醚部位作用效果最好,经药物处理48 h后,石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位对BGC-823细胞的IC50分别为0.290 mg·mL-1、0.470 mg·mL-1和0.734 mg·mL-1;SGC-7901细胞的IC50分别为0.323 mg·mL-1、0.393mg·mL-1和0.548 mg·mL-1。  Hochest33342染色证明茅苍术水提液的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位均能够诱导BGC-823和SGC-7901细胞发生凋亡。JC-1染色结果证明,石油醚部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位均可使BGC-823和SGC-7901细胞细胞线粒体膜电位降低,石油醚部位降低线粒体膜电位作用最明显。  从流式细胞仪检测结果分析,茅苍术水提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位可以选择性的阻滞胃癌BGC-823细胞于S期,将SGC-7901细胞SGC-7901细胞被阻滞在G0/G1期。在三个不同极性部位中,石油醚部位阻滞效果最好,其次是乙酸乙酯部位,正丁醇部位效果略差。  4、初步分析鉴定茅苍术石油醚药效部位的主要化学成分。采用LC-ESI-MS联用技术,鉴定了茅苍术石油醚部位中主要的的六个化合物,其中有三个倍半萜内酯类:苍术内酯Ⅰ,苍术内酯Ⅲ,3β-乙酰苍术内酯Ⅲ;两个倍半萜类:eudesm-4(15),7-diene-9α,11-diol和eudesm-4(15)-ene-7a,11-diol和一个聚乙烯炔类成分:4,6,12-tetradecatriene-8,10-diyne-1,3,14-triol。
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