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就巢是影响家禽繁殖性能的主要因素之一,而催乳素是禽类就巢发生和维持的关键激素。从分子水平上研究催乳素对番鸭就巢的调控,对番鸭就巢分子机理的研究有重要的指导意义。本试验从番鸭脑垂体组织快速提取总RNA,根据国外已发表的北京鸭催乳素基因设计引物,经反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增获得了特异性片段,将扩增片段与载体连接、克隆、测序后进行序列分析,为利用标记辅助选择或其他选育方法清除种鸭的就巢基因奠定基础,以加快番鸭的遗传进展和提高饲养效益。 (1) 首次采用RT-PCR技术扩增、克隆了番鸭催乳素基因,获得了全长为765bp的cDNA序列(基因登陆号:AM180924)。该序列最大的一个开放阅读框(ORF)从ATG开始到TAA结束,共编码229个氨基酸,分子量为25.8kDa,为进一步研究鸭就巢性及PRL基因的多态性、表达与调控奠定了基础。 (2) 通过BLAST进行相似性搜索,搜索结果表明该序列与催乳素的序列同源性最高。采用Signal IP对氨基酸序列进行潜在信号肽剪切位点预测,该氨基酸序列具有一个潜在信号肽剪切位点,位于第30—31个氨基酸之间,与家禽催乳素前体的信号肽裂解位点具有高度保守性。 (3) 与已报道的北京鸭、马岗鹅、皖西白鹅、莱茵鹅、家鸡、火鸡、鹌鹑等禽类催乳素基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比较,结果表明,不同品种间核苷酸序列同源性介于91.0%~99%之间,其中番鸭与北京鸭间的同源性最高(99%),与皖西白鹅、莱茵鹅、马岗鹅也有很高的同源性,均达到98%以上。经推导的相应氨基酸序列的同源性比较结果,番鸭与北京鸭氨基酸序列同源性为98.7%;与皖西白鹅、莱茵鹅、马岗鹅分别为98.7%、98.3%、99.1%,与家鸡、火鸡、鹌鹑的同源性在91.7%~93.3%之间。同源性分析结果表明,番鸭与北京鸭亲缘关系最近,其次是鹅品种;与家鸡、火鸡、鹌鹑也有很高的同源性,说明催乳素基因在进化过程中是相当保守的。 (4) 番鸭的催乳素氨基酸序列与北京鸭比较两者并没有太大差别,仅在第9位(K/E)、176位(V/I)、194位(K/I)各有一个突变,可以推测这两者之间就巢性的差异可能与催乳素的结构关系不大。但与家鸡的序列差异则较大。