目的:原发性高血压是一种遗传因素和环境因素共同引起的多基因遗传病,具有种族差异、外显迟滞和异质性等特征。内收蛋白是由α、β、γ3种亚单位构成的异源二聚体或异源四聚体,它的异型分子在红细胞、脑、肺、肾、肝脏等组织中均已检出。内收蛋白三个亚单位结构相近均可分为氨基端球形头部,颈部和羧基端尾部。其中α-内收蛋白受Ca2+/钙调蛋白、蛋白激酶C和蛋白激酶A的调节,参与细胞信号转导。此外,α-内收蛋白还与膜骨架的其他成分(如spectrin和actin等)及多种膜蛋白(如离子通道、交换体和离子泵等)相互作用,参与细胞膜离子转运,尤其与多种细胞膜Na+转运、Na+-H+交换、Na+-K+-Cl-协同转运系统、Na+-Li+反转运及钠泵活性密切相关,进而影响血压。人类α-内收蛋白定位于4号染色体(4p16.3),第10个外显子存在G614T单核苷酸多态性,导致编码该蛋白的460位甘氨酸(Gly)被色氨酸(Trp)替换。本实验以我国北方汉族人群为研究对象,采用PCR-RFLP和DNA序列测定等方法,对α-内收蛋白基因第10外显子部分DNA序列进行分析,进一步明确我国北方汉族人α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性与原发性高血压的关系。方法:以160例北方汉族原发性高血压患者和151例血压正常者为研究对象,血压测量采用校正的汞柱式血压计,测量上臂血压,患者测血压前15分钟不吸烟,背靠静坐5分钟;入选前测量非同日3次血压,取平均值;血压测量在标准状态下进行,即每天同一时间、同侧臂、用相同血压计、由同一测量人完成。入选标准为2005年我国高血压防治指南:有明确原发性高血压病史并且已服用抗高血压药物治疗者;未服用抗高血压药物,且非同日2次测得收缩压≥140mmHg和/或舒张压≥90mmHg,排除继发性高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、严重肝肾功能障碍者。其入选者为满足上述原发性高血压入选标准,且无高血压家族史,排除继发性高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、严重肝肾功能障碍者,入选的各个研究对象之间无亲缘关系。登记每个研究对象的一般临床资料并检测相关生化指标,包括:性别、年龄、家族史、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。所有研究对象需空腹12小时以上,于清晨取坐位采血,采集肘正中静脉血。各血样按相应生化指标检测要求做预处理:离心、分离上清,置于-80℃超低温冰箱保存等,待标本收集完成后同批测定,以减小批间误差。用含有抗凝剂的真空抽血管另外抽2ml静脉血,充分混匀后置于-80℃超低温冰箱保存,用于基因组DNA的提取。采用传统的酚/氯仿抽提法,从外周血白细胞中提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR-RFLP)方法检测α-内收蛋白第10外显子基因G614T(G为鸟嘌呤,T为胸腺嘧啶)的基因多态性,试剂主要有:磷酸缓冲溶液(PBS)、蛋白酶K(Pro Nase K)、抽提Buffer、Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇等。其他实验试剂和仪器有:聚合酶链反应引物(上海生物工程技术服务有限公司)、dNTPs(北京赛百盛基因技术有限公司)、DNA marker、RedTaq DNA聚合酶(北京赛百盛基因技术有限公司)、12%聚丙烯酰胺胶(PAG)、限制性内切酶(北京纽英伦生物技术有限公司)、英国Hybaid Express全自动扩增仪、美国Kodak凝胶成像系统。所有数据采用SAS 6.12统计软件进行数据分析。基因频率采用基因计数法,等位基因频率比例采用卡方检验,计量资料均以均数±标准差表示,计数资料以频数表示。Hardy-Weinberg平衡检验、组间基因型及等位基因频率的比较用四格表χ2检验;不同基因型的血压及指标差异采用两独立样本的t检验。P<0.05认为有统计学意义。结果:1.一般临床资料及生化指标比较:两组间在平均年龄、TC、LDL-C、HDL-C、TG方面无显著差异(P>0.05);原发性高血压组与正常对照组相比SBP、DBP水平均高于后者有显著性差异(P<0.05),因此具有可比性。2.经卡方检验各组基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,说明该研究人群具有代表性。3.α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性在EH组与对照组中,三种基因型构成比差异无统计学意义(P>0.05);等位基因频率差异亦无统计学意义(P>0.05)。4. GlyTrp和TrpTrp基因型者收缩压水平高于GlyGly基因型患者(P<0.05);GlyTrp基因型患者舒张压水平高于GlyGly和TrpTrp基因型者(P<0.05)。结论:我国北方汉族人群中存在α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性,但该基因多态性与原发性高血压发病未发现明显相关;携带α-内收蛋白460Trp等位基因的患者收缩压水平较高;GlyTrp基因型患者舒张压水平较高。