【摘 要】
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目的本研究选定Catnb老年鼠及RosaNotch小鼠(Rosa26位点插入双侧flox序列修饰终止子阻止表达活性NICD)为研究对象,利用Ad-Cre分别激活Catnb老年鼠骨细胞Wnt信号、RosaNotch小鼠骨髓基质细胞及骨细胞Notch信号,通过检测激活老年鼠骨细胞Wnt信号对BMSCs成骨分化、骨形成的影响及激活不同分化发育时期成骨细胞系细胞Notch信号对成骨分化、骨形成的影响探明N
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目的本研究选定Catnb老年鼠及RosaNotch小鼠（Rosa26位点插入双侧flox序列修饰终止子阻止表达活性NICD）为研究对象,利用Ad-Cre分别激活Catnb老年鼠骨细胞Wnt信号、RosaNotch小鼠骨髓基质细胞及骨细胞Notch信号,通过检测激活老年鼠骨细胞Wnt信号对BMSCs成骨分化、骨形成的影响及激活不同分化发育时期成骨细胞系细胞Notch信号对成骨分化、骨形成的影响探明Notch信号在老年鼠骨细胞Wnt信号对骨形成影响中的作用及潜在分子机制。方法1.Ad-Cre及Ad-GFP分别转染Catnb老年鼠（>18月龄）骨细胞,RosaNotch小鼠骨髓基质细胞、骨细胞;2.激活Wnt信号或Notch信号骨细胞分别与野生型C57BL/6小鼠BMSCs共培养;3.碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶生化定量检测碱性磷酸酶表达量,茜素红S染色检测成骨诱导21 d钙盐沉积水平;4.Western-Blot检测骨细胞β-catenin蛋白、NICD蛋白及Jag1蛋白表达情况;实时荧光定量PCR检测Wnt信号靶基因（Lef1、Axin2、Smad6、BMP4）,Notch靶基因（Hes1、Hes5、Hes7、Hey1、Hey2、HeyL）,成骨分化标志物（ALP、OSX、OCN、Runx2、ColⅠ、Bsp）、Notch配体（Jag1、Jag2、Dll1、Dll3、Dll4）以及Notch受体Notch1 mRNA转录水平。结果1.Wnt信号靶基因（Lef1、Axin2、Smad6）及β-catenin蛋白表达显著增高（P<0.05）提示体外激活Catnb老年鼠骨细胞Wnt信号;2.Notch信号靶基因（Hes1、Hes5、Hes7、Hey1、Hey2、HeyL）及NICD蛋白表达显著增高（P<0.05）提示体外激活RosaNotch小鼠BMSCs及骨细胞Notch信号。3.Wnt信号激活老年鼠骨细胞显著增强共培养BMSCs成骨分化标志物（ALP、OSX、OCN、ColⅠ、Runx2）mRNA转录水平（P<0.05）、21d钙盐沉积水平、Notch信号靶基因Hes1、Hey1、HeyL及Notch配体Notch1 mRNA转录水平;激活BMSCs中Notch信号显著增强成骨分化标志物（ALP、OSX、OCN、ColⅠ、Bsp）mRNA转录水平（P<0.05）及21d钙盐沉积水平;4.激活Notch信号骨细胞显著抑制共培养BMSCs成骨分化标志物（ALP、OSX、OCN、ColⅠ、Runx2、Bsp）mRNA转录水平（P<0.05）及21d钙盐沉积水平;激活Notch信号骨细胞Notch配体Jag1 mRNA转录水平显著增高,Dll4 mRNA转录水平显著降低;利用Crispercas9-mJag1慢病毒敲除Notch信号激活骨细胞中过表达Jag1后显著挽救共培养BMSCs ALP染色及成骨分化标志物（ALP、OSX、OCN、Bsp、Runx2）mRNA转录水平（P<0.05）。结论1.激活老年鼠骨细胞Wnt信号经激活共培养BMSCs Notch信号促进成骨分化及骨形成。2.激活骨细胞Notch信号抑制共培养BMSCs成骨分化及骨形成。
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