第一部分不同方法学对低值血小板检测的评价研究背景和目的血小板(bloodplatelet,PLT)是巨核细胞在骨髓中成熟后脱落下来的有生物学功能的血细胞成分,其计数在外周血中较为恒定。血小板计数检测是血液常规检查中非常重要的一项临床检验指标,尤其是对于多种原因引起的血小板减少患者。随着现在医疗科技水平的不断提升,越来越多的血小板检测方法应用于临床,但在临床工作实践中,我们发现因多种原因引起的血小板计数处于较低水平,血小板的检测受自身生理特性、疾病以及检验环境等多种因素影响,干扰常规检验方法对血小板计数的正确测定,导致低值血小板的检测也常常会出现假性增高或假性减低的情况,准确快速的检测低值血小板计数在当前的检验工作中仍需探索更为合适的检验方法。对于低值血小板计数的检查,不同的仪器不同的方法学原理所得到的血小板计数检查结果之间存在不同程度的差异。由于方法学的局限性,导致因不同疾病和病理状况引起的血小板减少很难通过机器检测自动识别,这种情况导致疾病的误诊和漏诊将给患者带来致命的风险。为此,我们以传统的血小板计数方法光学显微镜法为金标准,分析阻抗法、光学法、染料结合法三种方法对低值血小板检测的影响,寻找多种影响因素下最佳低值血小板的检测方法。研究对象与方法收集山东大学齐鲁医院于2016年2月至2017年12月门诊及住院患者中检验科检测的血小板计数小于100×109/L的低值血小板标本2823例患者纳入研究。分别采用阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-0)、荧光染料结合法(PLT-F)分别对检验科收集的低值血小板(PLT计数<100×109/L)标本进行检测,以传统的血小板计数方法光学显微镜计数血小板数量为金标准,比较三种方法对于不同影响因素对低值血小板检测结果的准确性,以期对于不同原因引起的低值血小板寻求最佳的检测方法。研究结果(1)当MCV<70fl,RDW>20时,PLT-I与OM的相关性系数低,中度相关,Passing-Bablok回归PLT-I与OM的线性回归方程的斜率95%CI内不包含1,Bland-Altman分析偏倚程度高,综合分析PLT-I与OM法血小板计数差异有统计学意义;PLT-O、PLT-F与OM的相关性分析结果示呈显著性相关;PLT-O、PLT-F与OM的线性回归方程示与参考方法OM差异无统计学意义。Bland-Altman分析PLT-O、PLT-F与OM法计数均有轻度偏倚,但是PLT-O的偏倚程度略高于PLT-F。(2)MCV介于80-100fl之间时,PLT-I、PLT-O、PLT-F与OM的相关性系数分别为r = 0.899,r = 0.973,r = 0.983,均呈高度相关;Passing-Bablok 回归分析结果PLT-I、PLT-O、PLT-F与OM的线性回归方程斜率95%CI均包含1,与参考方法OM差异无统计学意义。Bland-Altman分析结果PLT-I、PLT-O、PLT-F与OM法计数均有轻度偏倚,PLT-F法偏倚程度最小。将MCV介于80-100fl之间的标本根据血小板计数分为三组见表2:PLT介于20-100×109/1之间时,三种方法与参考方法OM之间差异均无统计学差异,PLT-I、PLT-O、PLT-F与OM法计数均有轻度偏倚,PLT-I的偏倚程度较PLT-O和PLT-F法高;PLT-F方法较为稳定,不随血小板计数的减少,发生偏倚改变,PLT-O法计数血小板随血小板数量的减少,其偏倚程度增加,与OM的一致性变差。PLT<20×109/l时,PLT-I与OM之间差异有统计学意义,不能准确计数血小板。(3)MCV>100fl时,Passing-Bablok回归分析结果三种检测方法均与参考方法OM差异无统计学意义。Bland-Altman分析示PLT-I、PLT-O、PLT-F与OM法计数均有轻度偏倚,PLT-I的偏倚程度较PLT-O和PLT-F法高。结论当MCV MCV<70fl,RDW>20时,由于小红细胞的干扰,PLT-I检测方法的准确度较差,PLT-O与PLT-F检测方法与OM无明显差异,对于这类标本可以采用这两种方法进行检测。当血小板计数低于20×109/L时,PLT-I对于血小板计数的准确性较差,PLT-F与OM血小板计数结果最接近,偏差最小,所以,当血小板计数低于20X 109/L,根据实验室条件选择PLT-F法或OM法进行血小板进行准确计数。第二部分EDTA依赖性假性血小板减少症的临床分析研究背景和目的假性血小板减少是指由自动分析仪检测血小板计数时血小板处于较低的水平,当对外周血涂片进行评估时,通常可以看到,在偶然发现的假血小板减少症患者中,血小板计数在正常范围内,并且临床上不会引起任何出血。目前,在诊断为血小板减少症的患者中,有相当大比例的假血小板减少现象是由于试管内凝血、巨大血小板存在、血小板诱导的自身凝集和EDTA作为样本管抗凝所致。目前EDTA依赖性假性血小板减少国内外无明确推荐的检测方法。本研究将行EDTA-PTCP临床分析,探讨该类患者标本的最佳检测方案。研究对象及方法收集山东大学齐鲁医院于2016年2月至2017年12月检验科使用血细胞分析仪XN-3000检测患者血小板计数,在结果分析系统显示结果异常和血小板低值的患者均使用SP-10进行血细胞涂片,然后有两名经验丰富的专家观察并行血小板计数,镜下观察发现血小板具有聚集现象的标本筛选出来,其中发现有30例患者有EDTA依赖性血小板减少。用血细胞分析仪计数血小板时,当机器提示血小板有聚集现象,更换不同抗凝剂如枸橼酸钠、肝素等抗凝采血管重新采血后重新进行检测。因构橼酸钠抗凝管内抗凝剂与全血的比例为1:9,所以用枸橼酸钠抗凝管所测结果需乘以稀释倍数,所得结果才是真实的计数结果。同时直接采血推片镜检,由两位有经验的血液细胞学专家在光学显微镜下计数血小板数量,比较不同抗凝剂标本与光学显微镜血小板计数的相关性及有无统计学差异。研究结果根据所研究的30例EDTA-PCTP患者标本发现EDTA-PCTP患者有以下特征:(1).使用EDTTA-K2抗凝管检测时血细胞分析仪报警提示血小板聚集成凝块,并通过显微镜得到证实;(2).EDTA抗凝管中的血小板计数结果低于100×109/L;(3).更换抗凝管例如枸橼酸钠抗凝或者肝素抗凝,血小板不出现聚集成凝块的现象;(4).该类患者缺乏血小板减少的临床表现,不出现紫癜、牙龈出血、血尿、经量增多的情况。EDTA-PCTP现象的标本,经更换不同抗凝剂如枸橼酸钠、肝素等抗凝采血管重新采血后重新进行检测,结果显示枸橼酸钠抗凝管对血小板计数影响最小,是EDTA-PCTP患者血小板计数的最佳替代方案。30例EDTA-K2依赖性血小板假性凝集患者,血小板抗体检测结果显示GPⅡb/Ⅲa阳性12例,GP Ⅰb/Ⅸ阳性7例,双阳性5例,PAIgG阳性16例(>78.8ng/107血小板)。结论及时识别并采用正确的方法纠正EDTA-PCTP现象在临床诊断和治疗上至关重要。EDTA-PCTP纠正最适合的抗凝剂选择是枸橼酸钠抗凝剂,除了更换抗凝剂外,还可以直接采血显微镜镜检或者不加任何抗凝剂采血后充分混匀进行血细胞分析仪检测。多数病例发现EDTA-PCTP存在血小板自身抗体,主要以Gp Ⅱb/Ⅲa、PAIgG为主。