【摘 要】
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大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是动物胃肠道中最常见的兼性菌群之一,在一定条件下能够引起畜禽动物多种疾病。目前,由于人们在畜牧临床上广泛、不合理的应用抗菌药物,多重耐药大肠杆菌(Multidrug-resistant Escherichia coli,MDR E.coli)的出现使常用一些抗菌药物治疗效果下降,甚至无效。有研究表明,许多中药成分具有良好的抑菌作用和耐药性消
【基金项目】
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宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(编号:2021BEF02041); 2020-2022 年宁夏回族自治区农业重大实用技术推广项目(规模养殖场减抗养殖关键技术开发与示范)
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大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)是动物胃肠道中最常见的兼性菌群之一,在一定条件下能够引起畜禽动物多种疾病。目前,由于人们在畜牧临床上广泛、不合理的应用抗菌药物,多重耐药大肠杆菌(Multidrug-resistant Escherichia coli,MDR E.coli)的出现使常用一些抗菌药物治疗效果下降,甚至无效。有研究表明,许多中药成分具有良好的抑菌作用和耐药性消减作用,因此,本研究探究了苦豆子提取物对从蛋鸡粪便中分离出的MDR E.coli的体外抑菌和耐药性消减的影响,以期为临床合理应用苦豆子提供一定的新思路。本研究从蛋鸡养殖场蛋鸡粪便样本中分离E.coli,运用药敏试验法和PCR法分析E.coli的耐药性;采用微量肉汤稀释法和棋盘法测定苦豆子(Sophora alopecuroides L.)提取物单用或与5种抗菌药物联用对分离MDR E.coli的体外抑制效果,酶标仪测定苦豆子提取物对MDR E.coli生长曲线的影响;结晶紫染色法测定苦豆子提取物对MDR E.coli生物被膜抑制作用及消除率影响,运用LB半固体培养基法观察苦豆子提取物对MDR E.coli的运动影响;RT-PCR法测定苦豆子提取物作用后对MDR E.coli相关耐药基因m RNA相对表达量的影响。结果如下:1.从60份蛋鸡粪便样本中共分离鉴定出41株E.coli;对除美罗培南和多粘菌素外的其它12种抗菌药物显示出较高的不同程度耐药,其中对磺胺异恶唑、复方新诺明和四环素3种抗菌药物耐药尤其严重,耐药率均超过95%,其次为氟苯尼考和氨苄西林,两者耐药率均在88%,对庆大霉素、头孢噻呋和大观霉素的耐药率在50%~80%之间,85%的分离菌株同时对7种以上抗菌药物耐药;14种耐药基因中检出bla TEM、bla CTXM、aac C2、aac(3)-Ⅱ、aph(3’)-Ⅱ、sul2、sul3和qnr S共8种耐药基因,其检出率依次为75.61%、7.32%、9.76%、9.76%、90.24%、53.66%、78.05%和92.68%。2.苦豆子提取物对标号为20号和25号MDR E.coli的MIC为125 mg/m L;苦豆子提取物与头孢噻呋、氟苯尼考联用对20号MDR E.coli呈相加作用,与头孢噻呋联用对25号MDR E.coli呈协同作用;与对照组先比,1/2MIC和MIC苦豆子提取物组可明显抑制MDR E.coli的生长,且延长生长曲线调整期;针对MDR E.coli生物被膜的研究发现,MIC和1/2MIC苦豆子提取物能够有效的抑制E.coli生物被膜的形成和群集运动,表现出较好的抗生物被膜活性。3.耐药性消除试验中,1/2MIC苦豆子提取物处理后MDR E.coli的耐药表型变化不明显,但可显著降低耐药基因bla TEM、bla CTX-M、aac C2、aac(3)-Ⅱ、aph(3’)-Ⅱ和sul3的m RNA表达量(P<0.05),对sul2和qnr S基因的m RNA转录水平无明显影响。以上结果表明,从蛋鸡粪便中分离的E.coli耐药性严重,苦豆子提取物对MDR E.coli具有良好的抑菌作用,且能够降低部分耐药基因的转录水平。
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