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蛭弧菌是一类具有噬菌体功能,能对人类食物中毒的致病菌和导致渔业养殖病害具有良好裂解清除效果的寄生性微生物。
本实验采用DNB双层平板法以九孔幼鲍致病菌Shewanella algae strain 27作为宿主菌从广东汕尾一鲍鱼养殖场池底污泥中筛选得到3株可以裂解沙门氏菌的菌株。通过观测3株菌在DNB双层平板上形成的噬菌斑的形状,同时用透射电镜观察它们的形态,并对照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版),可以鉴定这3株菌为蛭弧菌。
我们系统研究了各种环境因素包括pH值、盐度(NaCl)、二价金属离子(Ca2+、Mg2+)、谷氨酸钠和甘油对它们生长繁殖能力的影响,同时,我们在单因素实验的基础上,采用响应面的分析方法对蛭弧菌BDK-1的培养条件进行了优化。
本研究结果表明,3株海洋性蛭弧菌对3株沙门氏菌均具有比较好的裂解能力;3株蛭弧菌在pH6.0-8.0间均具有较好的生长繁殖能力,它们的最适pH为7.0;盐度对3株蛭弧菌的影响较小,在1.0-4.0%的盐度范围内均具有良好的生长活性,它们的最适盐度为2.5-3.5%;
二价金属离子(Ca2+、Mg2+)对蛭弧菌具有非常显著的影响,Ca2+、Mg2+浓度的提高(在0-7mM的范围内)可以有效增强蛭弧菌的生长活性和裂解效果;
甘油因子在实验期间对蛭弧菌的生长繁殖影响较小,最适浓度为3-5%时可促进蛭弧菌的生长繁殖;谷氨酸钠在浓度为3-7mM可显著提高蛭弧菌的生长繁殖能力。
蛭弧菌BDK-1的生长优化模型表明,其最佳培养条件为:宿主菌浓度为1×1010-1×1011CFU/mL,摇床速度为250rpm,盐度(NaCl浓度)为2.9%,培养液pH值为7.4,Ca2+、Mg2+浓度为6.4mM,谷氨酸钠浓度为4.2mM。蛭弧菌消除鸡蛋表面的沙门氏菌的人工模拟实验表明,蛭弧菌BDK-1在其浓度为106-1010PFU/mL时,可有效消除鸡蛋表面的沙门氏菌,显示了蛭弧菌在食品卫生安全应用的潜在价值。