复方布洛芬片是由布洛芬和对乙酰氨基酚组成的复方制剂，用于软组织损伤引起的疼痛，骨关节炎，肩周炎，类风湿性关节炎等。目前关于布洛芬和对乙酰氨基酚合用制剂的有关物质测定方法的文献未见报道，为保证药品质量的稳定可控，本课题采用高效液相色谱法检测复方布洛芬片中有关物质。钩藤[Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks]为茜草科(Rubiaeeae)钩藤属(Uncaria)植物。主要分布于广东、广西、湖南等南方各省。几十年来随着提取分离手段的不断进步，有关钩藤的化学成分研究取得了较大的成果。从钩藤中分离出的化学成分有吲哚生物碱类、三萜类、黄酮类、香豆素类、喹喏酸皂苷类、酚类及有机酸等，其中吲哚生物碱类有105个。本课题对钩藤所含的化学成分进行系统分离，得到5个化合物，并利用LC-MS和薄层色谱法对各单体化合物进行纯度检测和定性鉴别。本研究是按以下步骤完成的，内容结果如下：一、广泛查阅国内外相关研究资料结合布洛芬、对乙酰氨基酚两主成份及其相关物质的结构和性质，对磷酸水-乙腈、磷酸盐-甲醇、醋酸铵-甲醇和甲醇-水等多种流动相系统进行色谱分离条件的选择研究，确定采用pH＞5.3弱酸性的磷酸盐缓冲液水相和甲醇-乙腈混合有机相系统，进行复方布洛芬片有关物质的测定方法研究。通过对色谱柱、流动相组成、梯度、波长和pH值等条件优化，得到复方布洛芬片HPLC法有关物质测定的最佳条件：C18柱（ODS）（4.6×150mm，5μm），柱温35℃，检测波长225nm、245nm；流动相：以甲醇-乙腈(10:90)混合溶液为溶液A，磷酸盐缓冲液（pH5.80±0.10）-溶液A(95:5)为溶液B，洗脱梯度见表3。二、对建立复方布洛芬片有关物质测定的HPLC法进行耐用性、专属性、精密度、稳定性及定量限等方法学验证。耐用性试验考察色谱仪器、色谱柱、流动相组成、柱温、流速、pH等内容；对复方布洛芬片进行了强酸、强碱、氧化、高温、湿、光照等破坏性试验，以验证该方法的专属性。对氨基苯酚、对氯苯乙酰胺和4-异丁基苯乙酮采用外标法进行定量，经精密度、稳定性、定量限和检测限、线性与范围、回收率试验等方法学考察，其它单一杂质和总杂质采用主成份对照法定量。三、对复方布洛芬片进行了强酸、强碱、氧化、高温、湿、光照等破坏性试验，并对各杂质进行来源归属分析，探讨相关物质产生的条件和途径。结果表明：复方布洛芬片在酸性、碱性和氧化条件下，主成分容易降解产生新的杂质，这些新杂质主要由对乙酰氨基酚产生，其中来源于对乙酰氨基酚的对氨基酚杂质可在酸性和碱性破坏条件下产生。在高温、光照和湿的环境中，复方布洛芬片性质较为稳定，主要产生布洛芬的杂质，光照条件下会产生4-异丁基苯乙酮。故提示药品贮存应注意避光，干燥密封，避免与酸、碱、氧化性物质接触。四、进行了钩藤化合物单体制备研究。钩藤钩茎5kg，用15倍量70%甲醇、0.1%HCl回流提取3次，每次3h，滤过，合并三次提取液，减压回收溶剂，得到钩藤的甲醇浸膏。浸膏加适量水混匀后，用浓氨水调pH至9-10，依次用二氯甲烷、正丁醇萃取，回收溶剂，得二氯甲烷层、正丁醇层①，剩余水溶液用HCl调pH至1，用正丁醇萃取，回收溶剂，得正丁醇层②。二氯甲烷层和正丁醇层反复经硅胶柱层析、氧化铝柱层析、Sephadex LH-20柱层析、C18反相硅胶色谱方法纯化分离，得到去氢毛钩藤碱、缝籽嗪甲醚、阿枯米精、毛钩藤碱、异去氢钩藤碱5个单体化合物。