论文部分内容阅读
目的小鼠是生命科学研究最常用的模型动物,小鼠早期胚胎体外发育技术在许多的领域都起着重要的作用,比如发育生物学,胚胎移植等。小鼠早期胚胎体外发育阻滞,是实验研究中经常遇到的问题。KSOM等一些培养液在许多实验中被证实对突破早期胚胎发育有着积极的作用,但是囊胚移植后的成熟率低成为了普遍存在的问题。TSA(Trichostatin A),具有抑制真菌作用的化合物。很多实验已经证明了使用TSA处理过的动物早期胚胎,核移植后胚胎的发育率都有明显升高,原因是TSA通过抑制去乙酰化酶的活性来提高组蛋白的乙酰化程度,促进表观遗传重编程。所以,在本次实验中使用TSA对小鼠早期胚胎进行处理,观察其在体外发育的过程和变化,探讨TSA对小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法(1)超数排卵:C57BL/6小鼠,3-4周龄,雌性,SPF级,PMSG10 IU/只腹腔给药,48h后hCG 10 IU/只腹腔给药,致超数排卵,15H后收集小鼠的卵母细胞。(2)孤雌胚的建立:根据文献资料以KSOM为培养液,使用不同参数的电激活卵母细胞并培养24H,观察记录卵裂率和囊胚率。从而确定合适的电激活参数。(3)在KSOM中添加浓度为0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的TSA分别培养12H和24H,之后观察和记录24H以及第6天的卵裂率和囊胚率。(4)在显微镜下对2细胞期和囊胚期胚胎计数。通过数据分析说明TSA对小鼠的早期胚胎发育的作用。结果(1)通过4次重复性实验,最终确定孤雌胚的电激活参数为脉冲强度1.2Kv/cm,脉冲宽度100μs,时间间隔1s,脉冲次数2次。(2)通过4次重复实验,分别在KSOM中加入浓度为0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的TSA。观察发现加入浓度为50μmol/L和100μmol/L的TSA培养12H,小鼠胚胎细胞发育到2细胞期和囊胚期的成功率都有所增加,但是差异不显著。结论在KSOM培养液中添加TSA处理小鼠早期胚胎12H和24H,实验结果发现观处理12H的能够提高胚胎的发育率和卵裂率,而处理24H的则会出现胚胎的发育率和卵裂率明显下降,这说明TSA作用时间过长可能会出现组蛋白的超乙酰化,对胚胎发育产生抑制作用。所以,50μmol/L的TSA处理12H有助于提高小鼠胚胎的体外发育率和卵裂率,但是差异不显著。