论文部分内容阅读
硬脂酰辅酶A脱氢酶(SCD, stearoyl-CoA desaturase)属于内质网膜结合蛋白,是饱和脂肪酸向单不饱和脂肪酸转化的限速酶。无论是从头合成还是从日粮中获取的饱和脂肪酸,SCD均可以催化其在9号和10号碳原子之间脱氢形成一个双键。SCD主要催化软脂酸和硬脂酸形成棕榈油酸和油酸,而且SCD在调节细胞膜流动性和脂类代谢过程中也有着重要作用,这一作用是通过调节饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比例完成的,提高这个比例会引发一系列疾病,例如:肥胖、高血压、糖尿病、免疫紊乱、心血管疾病和癌症等。单不饱和脂肪酸在诸多疾病中的积极作用,使其在“健康肉”的生产中具有重要意义。此外,SCD1基因的单核苷酸多态性对肉质中的pH、大理石纹等级、失水率、熟肉率、肌内脂肪含量和肌肉颜色等性状有显著影响。本试验采用RT-PCR、分子克隆、RT-qPCR、Western blotting以及气象色谱法等实验技术对SCD1基因和肌肉脂肪酸进行了初步研究,结果如下:1.获得天府肉羊SCD1基因的编码区全序列,序列长1080bp(GeneBank:KT315581),编码359个氨基酸。SCD1蛋白是疏水蛋白,含有12个磷酸化位点、4个跨膜结构域和一个可能的N-糖基化位点,不含信号肽序列。核酸和氨基酸序列比对发现,SCD1基因与哺乳动物具有高度的相似性,其中和绵羊的相似性最高。系统进化树分析表明,天府肉羊SCD1基因与绵羊和牛的SCD1基因同源性最高,与黄颡鱼SCD1基因同源性最低。2.采用RT-qPCR方法分析SCDl基因在90、180和270日龄天府肉羊的8个肌肉组织中的表达情况,结果表明,在检测的肌肉组织中均有SCD1表达,并且日龄、肌肉及日龄与肌肉的交互作用对SCD1基因的mRNA相对表达水平均有极显著影响。相同日龄不同肌肉的天府肉羊SCD1基因相对表达量的多重比较结果表明:3个年龄段的三角肌的SCD1基因相对表达量均极显著高于其他7个肌肉组织(P<0.01);90日龄臂三头肌的SCD1基因相对表达量极显著高于腓肠肌和半膜肌(P<0.01);180日龄腓肠肌、臂三头肌和股二头肌的SCDl基因相对表达量极显著高于股四头肌(P<0.01);270日龄股二头肌的SCD1基因相对表达量极显著高于除三角肌以外的其他6个肌肉组织(P<0.01),并且臂三头肌、半膜肌和背最长肌的SCD1基因相对表达量极显著高于臀中肌、腓肠肌和股四头肌(P<0.01)。相同肌肉在不同日龄的天府肉羊SCD1基因相对表达量的多重比较表明:天府肉羊8个肌肉组织的SCD1基因相对表达量均表现出与日龄密切相关的趋势,SCD1基因相对表达量先升高后降低,在180日龄达到最大值(P<0.01),三角肌、股二头肌、股四头肌、腓肠肌(P<0.01)和背最长肌、半膜肌(P<0.05)在3月龄的SCD1基因相对表达量最低。3. 采用Western blotting方法分析SCD1蛋白在90、180和270日龄天府肉羊的8个肌肉组织中的表达情况,结果表明,在所有检测的肌肉组织中均有SCD1表达,3个年龄段的半膜肌SCD1蛋白表达量均极显著低于同日龄其他7个肌肉组织(P<0.01),90日龄背最长肌和三角肌的SCD1蛋白表达量极显著高于其他6个肌肉组织(P<0.01),180日龄三角肌的SCD1蛋白表达量极显著高于其他7个肌肉组织(P<0.01),270日龄臀中肌的SCD1蛋白表达量极显著高于其他7个肌肉组织(P<0.01)。4. 采用气相色谱法分析测定90、180和270日龄天府肉羊的8个肌肉组织中棕榈油酸和油酸的含量,结果表明,日龄对棕榈油酸和油酸含量有极显著影响(P<0.01),而肌肉以及肌肉和日龄的互作效应对这两种脂肪酸的含量影响不显著。棕榈油酸在180日龄的背最长肌和臂三头肌中的含量显著高于臀中肌(P<0.05),油酸在270日龄的半膜肌中的含量显著高于股四头肌。除此之外,两种脂肪酸在三个年龄段中不同肌肉间的含量没有显著性差异。随着日龄的增长,棕榈油酸在各肌肉组织中的含量逐渐降低,而油酸的含量逐渐升高。臀中肌、三头肌、股四头肌和腓肠肌在90日龄的棕榈油酸含量极显著高于270日龄(P<0.01),背最长肌、角肌、股二头肌和半膜肌在90日龄的棕榈油酸含量显著高于270日龄(P<0.05)。背最长肌、三角肌、股二头肌和半膜肌在270日龄的油酸含量显著高于90日龄(P<0.05),其他4个肌肉组织在270日龄的油酸含量与90日龄无显著性差异。5. 对SCD1基因、蛋白表达水平与肌肉组织中棕榈油酸和油酸的相关性分析表明,SCD1基因在肌肉组织中的表达量与棕榈油酸和油酸含量没有显著的相关性。SCD1蛋白表达量与棕榈油酸含量呈负相关关系,相关系数为-0.644(P<0.01);SCD1蛋白表达量与油酸含量呈正相关关系,相关系数为0.675(P<0.01)。