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在世界范围内，疯草是危害草原畜牧业最严重的一类毒草。茎直黄芪是疯草中的一种，在我国西藏地区广泛分布，对西藏地区畜牧经济造成巨大损失。苦马豆素是疯草中的主要毒性成分，除了引起牲畜中毒以外，还有着很好的抗肿瘤和免疫刺激效果，吸引了国内外学者的广泛关注和研究。目前苦马豆素获取主要通过植物提取方法，提取率低，耗能高，需要改进苦马豆素现有提取方法，同时需要对苦马豆素的微量定量检测方法进行研究，以满足进一步对动物中毒机理以及抗肿瘤研究的需要。本文的研究工作建立了HPLC和GC两种茎直黄芪中苦马豆素分析方法，研究了微波和纤维素酶方法提取茎直黄芪中的苦马豆素，并采用正交试验优化获得了最佳提取工艺条件，同时建立了藏山羊血清中苦马豆素GC-MS分析方法。 1、HPLC和GC两种茎直黄芪中苦马豆素分析方法的建立 进样口温度为260℃，火焰离子化检测器(FID)温度为260℃，柱子初始温度为150℃，程序升温5℃/min（8分钟），再程序升温30℃/min(2min)，载气为高纯氮气，流速为1mL/min，进样量为1μL的色谱条件下，以D-甘露醇(D-Mannitol)为内标，在此条件下建立茎直黄芪中苦马豆素GC分析方法，测定茎直黄芪中苦马豆素含量为89.2±0.29mg/kg。 色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-20mM磷酸二氢铵水溶液(PH=7.8)(2∶98)，柱温为30℃，流速为0.8mL/min，检测波长为205nm，进样量为20μL，在此条件下建立茎直黄芪中苦马豆素HPLC分析方法，测定茎直黄芪中苦马豆素含量为76.5±0.21mg/kg。 2、纤维素酶法和微波法提取茎直黄芪中苦马豆素的研究 采用正交试验方法对纤维素酶辅助提取茎直黄芪中苦马豆素工艺条件进行优化，得到的最佳提取工艺条件为:茎直黄芪粉碎为80目、酶解液PH为4.5、40倍料液比、酶用量为茎直黄芪的3.5％、温度50℃下酶解时间3h，苦马豆素的提取率为39.41mg/kg，即0.003941％。 采用正交试验方法对微波辅助提取茎直黄芪中苦马豆素工艺条件进行优化，得到的最佳提取工艺条件为:在室温下，按茎直黄芪与石油醚料液比(M∶V)1∶5进行超声波脱脂处理1h，然后用甲醇作为提取剂进行微波提取，茎直黄芪与甲醇料液比(M∶V)1∶10，微波功率280W，提取时间20s。在优化提取条件下，苦马豆素的提取率可达到0.009264％。 3、藏山羊血清中苦马豆素GC-MS分析方法的建立 色谱柱HP-5MS，（30m×0.25mm×0.25μm）;载气为高纯氦气，流速为1ml/min，分流比为1∶20;柱温设置:初始温度150℃，10℃/min程序升温6min到210℃，持续1.5min，然后25℃/min程序升温2min到260℃，再持续1.5min。上样量为1μL;质谱条件:电离源为EI，电离电压70eV，传输杆温度为230℃，离子源温度为280℃，SIM定量方法，选择定量离子M/Z:185。PFTBA调谐，使其离子丰度、仪器的分辨率和灵敏度达到最佳匹配值。在此条件下，建立了藏山羊血清中苦马豆素GC-MS分析方法，并测定了藏山羊血清中苦马豆素含量的变化。