人诺如病毒（HuNoV）是食源性疾病和儿童严重腹泻的主要原因,在轮状病毒疫苗研制出之后,该病毒被认为是导致严重儿童腹泻最主要的病原体。尽管这些病毒很重要,但由于其在体外难以培养,人们对这种病毒的了解有限。据估计它们在全球贫困地区造成了超过一百万就诊量和以及200000人的死亡。该病毒主要通过粪-口或气溶胶途径传播。诺如病毒感染好发于冬春季节,各年龄段人群普遍易感,一般以婴幼儿、儿童、老人以及免疫力低下的人群为主,引起的疾病具有自限性,持续时间为24～48h。由于该病毒基因型众多,变异快,容易发生基因重组等特点,使得人类对诺如病毒的基本特征以及致病机制了解有限,并且这一点也极大的限制了对诺如病毒抗体的研究。所以了解自然感染以及模拟诱导产生的人诺如病毒的免疫学反应对于诺如病毒的检测以及了解病毒感染人体的免疫应答作用机制至关重要。诺如病毒衣壳蛋白中的P结构域是导致病毒基因组差异性以及抗原特异性的主要部位,该部分属于衣壳蛋白中的高变区,携带了病毒对外界反应的主要抗原位点。针对P结构域表达的病毒蛋白可以有效的引起机体的免疫应答,从而使抗体的制备变得更加高效和特异。由于诺如病毒基因型种类繁杂,我们要找到近些年来流行的优势亚型毒株,便可以使之得到更好的应用。在过去的十年中,GⅡ.4亚型是大多数临床病例诺如病毒感染性胃肠炎的主要原因,近些年来也一直是流行的主要优势毒株之一,所以在本课题中对这种亚型进行研究。本课题研究的主要内容包括:（一）一株鼠诺如病毒以及5株噬菌体的全长扩增以及分析并利用Sanger测序,联合宏基因组的高通量测序结果,完成了 MuNoV的扩增。结果为,该 5 种 Microvirus,分别命名为 UJSM1,UJSM3,UJSM7,UJSM14,UJSM20.其基因组长度分别为4737 bp,5121bp,5211 bp,5 254 bp,4722 bp.其中UJSM7和UJSM14属于Gokushovirinae,UJSM1和UJSM3,UJSM20分别属于两个潜在的新亚科。该MuNoV菌株（命名为UJSMN01）的基因组序列为7383 bp,含有三个ORF.系统发育分析结果显示,该毒株属于GV亚型,并与韩国菌株（FJ446719）有最高得相似度（91%）。MuNoV和五株Microvirus的基因组序列得GenBank登录号分别为MW018367,MW073821,MW073822,MW073823,MW073824 和 MW073825。（二）诺如病毒GⅡ.4 P domain的原核表达、蛋白纯化以及复性通过查阅文献选择诺如病毒GⅡ.4优势毒株,选取编码GⅡ.4 P domain的核苷酸序列交予公司合成,将重组表达载体PET-28a-PUJS导入大肠杆菌原核表达,进行蛋白纯化以及复性得到了 GⅡ.4 P domain蛋白。Western Blot显示大小在35kDa出处有一明显免疫条带。复性后的蛋白浓度为0.22mg/mL。（三）多克隆抗体的制备将纯化复性后的蛋白与佐剂混匀,免疫新西兰大白兔,免疫时长为5周。免疫结束后心脏取血,分离血清,间接ELISA检测抗体显示效价为1:819200。利用该抗体检测诺如阳性样本,可以得到有效检测度。本课题研究结论:我们利用宏基因组学的方法发现了一株鼠诺如病毒株,并扩增出该毒株的全长序列以及样本中的5株噬菌体序列,对于诺如病毒分子生物学特征做出了进一步的研究以及丰富了病毒数据库。并且对于人诺如病毒流行的优势亚型毒株GⅡ.4,针对其包含了主要抗原位点的P domain进行基因序列合成,构建了 GⅡ.4P domain的表达载体,并用大肠杆菌原核表达系统成功表达出P蛋白,并将其命名为Pujs.Pro。进而免疫新西兰大白兔,数周后产生多克隆抗体,经分析检测,该抗体效价较高,可以用于检测诺如病毒粪便样本里的病毒颗粒。这为诺如病毒与受体之间的免疫应答机制的研究以及制备快速检测诺如病毒平台的建立提供了重要基础。