论文部分内容阅读
目的：研究在雌性大鼠孕期和体外培养睾丸间质细胞（Leydigcell）中，大豆异黄酮（SIF）暴露对雄性子代生殖发育可能造成的影响和对Leydig细胞中胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）基因表达及睾酮（T）分泌的影响。方法：实验分两部分进行。动物实验部分：SD大鼠按雌雄2：1同笼交配获取40只孕鼠。将孕鼠随机分为5组：0mg/kg（对照组）和25mg/kg、50mg/kg、150mg/kg、450mg/kgSIF暴露组。在母鼠孕期13-19天将SIF以花生油为溶剂灌胃染毒。F1雄鼠于出生后第18天检测其肛殖距、身长、尾长等发育指标，剖杀称取睾丸、肝脏和肾脏等内脏重量，用放免法测血清中黄体生成素（LH）和睾酮（T）分泌水平，用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测睾丸组织中胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、苗勒管抑制物（MIS）和β-雌激素受体（ERβ）的基因表达水平。细胞培养部分：建立SD大鼠Leydig细胞的原代离体培养方法，用3β-HSD染色观察并鉴定Leydig细胞。获得纯度>90％的Leydig细胞后用SIF进行染毒，染毒剂量分别为0ng/ml（阴性对照组）、50ng/ml、250ng/ml、1000ng/mlSIF组和50ng/ml雌二醇组（阳性对照组），24小时后，用RT-PCR法检测Leydig细胞中P450scc和3β-HSD的基因表达情况，同时用ELISA法测定细胞培养上清中P450scc、3β-HSD酶蛋白含量和上清中T分泌水平变化。结果：动物实验结果显示：在50mg/kg剂量以下时表现出随SIF剂量增加促进F1雄鼠的生长发育，高于50mg/kg时，随SIF剂量的增加开始表现为抑制F1雄鼠发育的趋势，在450mg/kg时睾丸系数和肛殖距等较对照组有明显降低（p<0.05）。放免结果显示SIF对血清LH水平无明显影响，而血清T水平在150mg/kg、450mg/kg却有明显的提高（p<0.05）。RT-PCR结果显示SIF可以降低ERβ表达（p<0.01）；对P450scc表达无明显影响；在150mg/kg和450mg/kg时可以明显促进MIS表达（p<0.01）。细胞培养实验结果显示：与阴性对照组比较，随SIF染毒剂量增加，P450scc基因表达和细胞培养上清中P450scc酶蛋白量呈现逐步增加趋势，而3β-HSD基因表达和细胞培养上清中3β-HSD酶蛋白量呈现逐步降低趋势，且二者在250ng/ml、1000ng/mlSIF剂量组与阴性对照组比较差异显著。细胞培养上清液中T水平较阴性对照组有明显增加（p<0.01）。结论：1.孕期暴露SIF可以干扰雄性子鼠内分泌水平和相关基因表达，并且各基因受SIF影响程度不同，SIF在较低剂量（25mg/kg）即可明显干扰ERβ转录。SIF较高剂量（450mg/kg）时可抑制F1雄鼠生殖系统的正常发育。2.在本实验剂量下，SIF可以增加Leydig细胞T分泌，可以促进P450scc转录，抑制3β-HSD转录水平。