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前言肿瘤侵袭转移是恶性肿瘤最重要也是最本质的生物学特征,是引起恶性肿瘤患者预后不良和死亡的主要原因。目前,胃癌仍是我国乃至全世界发病率和死亡率很高的恶性肿瘤。胃癌早期没有特异性的症状,大多数患者就诊时已到晚期,而晚期胃癌预后很差,患者常常因为广泛的侵袭转移而死亡。因此,对胃癌侵袭转移相关免疫分子和基因的研究,可以为胃癌侵袭转移的早期诊断和靶向治疗提供帮助和依据。胃癌的侵袭转移在本质上是一个多步骤的复杂事件,包含下列几个主要过程(1)肿瘤细胞与正常细胞、细胞外基质的粘附改变(2)细胞外基质降解增加(3)肿瘤细胞的迁移(4)新生血管形成(5)癌细胞逃避宿主免疫监视得以生存增殖。但目前胃癌侵袭转移分子机制尚未明确,寻找及研究胃癌侵袭转移相关基因及其产物的表达变化和功能,对早期诊断、指导治疗、评价预后具有重要的临床意义。本文就肝素酶、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-14、钙粘蛋白在胃癌组织及胃周正常粘膜的表达进行了研究,并就肝素酶、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-14、钙粘蛋白与胃癌的生物学行为进行了统计学分析,以期了解肝素酶、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-14、钙粘蛋白作为胃癌复发或转移的临床筛选指标的可能性。实验方法1、收集2007年中国医科大学附属一院胃癌手术标本及病理石蜡块。67例胃癌组织及癌旁正常胃组织取自中国医科大学附属一院肿瘤科2007年4月-2007年8月间手术切除的新鲜标本。每例分别取胃癌组织及癌旁正常胃组织(距癌缘5cm以上)各一块,-80℃冰箱保存。2、免疫组织化学方法检测肝素酶、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-14、钙粘蛋白在胃癌及胃周正常粘膜的表达。3、Western blot方法检测肝素酶、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-14、钙粘蛋白在胃癌及胃周正常粘膜的表达。4、RT-PCR方法检测肝素酶、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-14、钙粘蛋白基因在胃癌及胃周正常粘膜的表达。5、统计学分析应用SPSS10.0统计软件包,采用卡方检验、t检验和spearman等级相关分析方法,P＜0.05定为统计学上有显著性差异。实验结果1、肝素酶在胃癌组织中的表达增高。免疫组化结果显示,肝素酶蛋白在胃癌组织中的表达率为76.1%,在正常胃黏膜也有20.9%的表达率,二者有统计学差异(P＜0.01)。Western blot实验显示,肝素酶蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是77.6%及23.9%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.915±0.124和0.665±0.095(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,肝素酶mRNA在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是74.6%及3 1.3%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.399±0.054和0.141±0.035(P＜0.05)。肝素酶蛋白及mRNA的表达与胃癌的大体类型,浸润深度,细胞分化程度,组织学生长方式,淋巴转移及TNM分期呈正相关,而与肿瘤大小无关。2、免疫组化结果显示,基质金属蛋白酶MMP-2蛋白在正常胃组织不表达,而在胃癌组织中显著高表达,表达率为85.1%,与正常胃组织比较有统计学差异(P＜0.05)。Western blot实验显示,基质金属蛋白酶MMP-2蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是88.1%及16.4%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.936±0.143和0.632±0.115(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,基质金属蛋白酶MMP-2mRNA在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是83.6%及56.7%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.573±0.084和0.364±0.065(P＜0.05)。基质金属蛋白酶MMP-2表达与胃癌的浸润深度,细胞分化程度,淋巴转移及TNM分期呈正相关,而与肿瘤大小、大体类型、组织学生长方式无关。3、免疫组化结果显示,基质金属蛋白酶MMP-14在正常胃组织不表达,而在胃癌组织中显著高表达,表达率为91.0%,与正常胃组织比较有统计学差异(P＜0.05)。Western blot实验显示,基质金属蛋白酶MMP-14蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是94%及19.4%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.908±0.138和0.563±0.102(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,基质金属蛋白酶MMP-14mRNA在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是77.6%及43.3%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.887±0.104和0.553±0.085(P＜0.05)。基质金属蛋白酶MMP-14表达与胃癌的浸润深度,细胞分化程度,淋巴转移及TNM分期呈正相关,而与肿瘤大小、大体类型、组织学生长方式无关。4、免疫组化结果显示,钙粘蛋白在胃癌组织中表达降低或缺失。在67例正常胃粘膜上皮表达阳性率为94%;而在胃癌组织中瘤细胞染色与正常上皮细胞相似,表达降低,有时可见胞浆染色,阳性表达率为55.2%,其差别有显著性意义(P＜0.05)。Western blot实验显示,钙粘蛋白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是50.7%及97%(P＜0.05)。在两者中的表达平均指数分别为0.557±0.113和0.924±0.141(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,钙粘蛋白mRNA在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达率分别是86.6%及98.5%(P＜0.05)specif。在两者中的表达平均指数分别为0.541±0.084和0.722±0.115(P＜0.05)。胃癌钙粘蛋白的表达缺失与胃癌的浸润深度,细胞分化程度,淋巴转移及TNM分期呈正相关,而与肿瘤大小、大体类型、组织学生长方式无关。5、MMP-2、MMP-14在胃癌组织中高表达有相关性,肝素酶、MMP-2、钙粘蛋白的表达无相关性。结论1、肝素酶在胃癌组织中的表达增高,与胃癌的生物学行为及预后判断有关。2、MMP-2在胃癌组织中高表达,与胃癌的生物学行为及预后判断有关。3、MMP-14在胃癌组织中高表达,与胃癌的生物学行为及预后判断有关。4、钙粘蛋白在胃癌组织中表达降低或缺失,与胃癌的生物学行为及预后判断有关。5、联合检测肝素酶、钙粘蛋白、基质金属蛋白酶MMP-2或MMP-14在胃癌中的表达对判断预后,制定合理的治疗方案具有更高的参考价值。