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阿片受体参与中枢神经系统对机体的调节已为共识。这些作用包括镇痛、调节情绪、抑制呼吸、减慢心率等。近年来阿片受体的外周调节作用也逐渐受到重视。Ventura等利用放射配体结合实验证实心肌细胞存在κ和δ阿片受体，但Tai等却只能检测到κ-阿片受体。κ-阿片受体属PTX敏感的G蛋白耦连受体。在心肌细胞，利用Fura-2荧光指示剂发现，激活κ-阿片受体经磷脂酶C途径促进IP3和DAG的生成，DAG又激活下游的蛋白激酶C（PKC）。IP3促进肌浆网内的Ca2+释放，而PKC可抑制Ca2+的回摄。其总体效应是使细胞内自由Ca2+的含量增加，耗竭肌浆网内的Ca2+。离体或在体实验观察到，κ-阿片受体激动后的主要主要作用是：减弱心肌收缩力、减慢心率、并在缺血状态下引起心律失常。 缺血预处理对心肌具有保护作用，它是指心脏经短暂的缺血后，对其后的持续严重的缺血性损伤有保护作用。其保护作用主要体现在减少持续缺血再灌注心肌梗塞范围，促进再灌注后心肌功能的恢复，阻止急性缺血期或再灌注后心律失常等等。缺血预处理可产生第一和第二保护窗，第一保护窗持 第四军医大学博士学位论文 续 2－3小时，于预处理结束即可发生。第二保护窗于预处理 12小时后发生 可持续至72小时．缺血预处理的作用被认为是迄今所知最强的心脏内源性 保护机制．近年来的研究发现纳洛酮可阻断心肌缺血预处理的保护作用．Wu 等利用离体成年心肌细胞发现掖道，用。阿片受体激动剂U50，488H预处理 心肌细胞可以模拟代谢抑制预处理的保护作用，而且p阿片受体阻断剂Nor－ BNI阻断代谢抑制预处理的保护作用．这些结果提示。阿片受体参与心肌缺 血预处理的保护作用．但是其保护机制还不清楚． 各种应敝应，包括：热应激、缺血、炎症等都可以诱导体内快速高效 合成一系列多基困同一家族蛋白即热休克蛋白mSPS入 HSP 70是应敝应 中标最为迅速的蛋白，利用转基困细胞或转基固大鼠证实HSPS具有心肌细 胞保护作用．是否 HSPS也介导激活。－阿片受体弓】起的第H窗保护作用尚需 实验研究． 阿片受体的另一个特点是持续激活后，对再次给予受体激动剂的反应减 弱甚至消失．这种现象也称为受体的耐受．在体和离体实验都证实，。C肌细 胞卜阿片受体也具有这一特点．该耐受现象表现为在离体灌流心脏，U50，488H 不再能引起心律失常和负性变力作用；在分离的单个。。肌细胞，用U50，488H （10“M）孵育24小时，同样观察到U50，488H （3XI”’M）减低电刺激引起 的C4瞬边的作用消失．PKC介导急性激活阿片受体对。C肌细胞内C4的 调节，但是也有报道PKC参与神经来源细胞的卜和8阿片受体的耐受．那么 持续激活阿片受体 PKC各亚型的活性有何变化？是否与。－阿片受体。匝性耐 受有关帧待实验研究．为此本课题围绕上迷两点问题进行了探讨． 4 第四军医大学博士学位论文 第一部分： HsP7o介导U5oA脓H预处理·C肌细胞引起的第二窗保护作用 目的：观察是否H盯7OS介导了U5o，488H预处理心肌细胞引起的第二 窗保护作用．实验方法：采用离体培养的咸年大鼠心肌细胞的缺血预处理模 型，观察乳酸脱氢酶（LDH）的释放、细胞受损指数以及细胞存活率，同时 检测 HSP70S蛋白表这的变化．实验结果：实验发现，在 3上0 pM ＄A范围 内，U50，488H预处理明显降低再次缺血再灌注后LDH的撇和细胞受损指 数，细胞的存活率明显增加。与该现引＠伴随的是，10 pM浓度的 U50，488H 显著增加HSP70和HSC70蛋白的表这．但是未观察到HSP90和HSP32表 达的增加．U50，488H预处理对心肌细胞的保护与代谢抑制预处理（Metabolic I讪bition Pretratlnent，MIP）的作用相类同，耳 U50，488H预处理可模拟 MIP 的作用。并且 MIP以及 U50，488H预处理的保护作用都可以被卜阿片受体的 桔抗剂m七IM恤rph加hC（O卜BNI，5卜M）所部分或完全阻断．为进。 步验证是否HSP70和HSC70蛋白都介导U50，488H和＊P预处理产生的第 二窗保护作用，细胞培养液中加入浓度为m卜M特异的相应与HSP7o和 HSC70的反义链核酸．实脸发现，HSP70的反义链核酸不仅阻断了HSP70 蛋白的表达，同时也能阻断U50，488H和＊P预处理引起的LDH释放减少 及细胞存活率增加的作用。但是HSC70的反义链核酸虽能阻断HSC70蛋白 的表达