背景:肺成纤维细胞(Lung fibroblast,FB)过度增殖活化,不断向肌成纤维细胞(Lung myofibroblast)转化,并伴随着细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)的异常沉积,最终导致肺纤维化疾病的发生发展。已有研究发现蓝萼甲素(GlaucocalyxinA,GLA)可减轻小鼠肺纤维化,但蓝萼甲素减轻肺纤维化的分子机制尚未阐释。本文将从肺成纤维细胞转化的角度探究蓝萼甲素抗肺纤维化的作用及其分子机制。方法:(1)建立TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化模型,设置对照组、模型组、蓝萼甲素组,应用Western Blot检测蓝萼甲素抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化模型中α-平滑肌肌动蛋白(α-Smoothmuscleactin,α-SMA)的表达水平;(2)采用细胞免疫荧光法检测各实验组肺成纤维细胞中细胞肌丝形成情况;(3)胶原胶收缩实验测定各实验组中含肺成纤维细胞胶原胶收缩情况;(4)Western Blot检测蓝萼甲素对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化过程中基质蛋白Fibronectin表达水平的影响;(5)Western Blot检测蓝萼甲素对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化过程中Smad2、Smad3、GSK3β、ERKI/2等磷酸化表达水平的影响;(6)应用SILAC定量蛋白质组学分析蓝萼甲素抑制肺成纤维细胞的转化过程中细胞内蛋白质差异表达情况。结果:(1)2μM、4μM蓝萼甲素能够显著降低TGF-β1诱导的α-SMA蛋白表达水平,并呈剂量依赖性;(2)蓝萼甲素分别作用于TGF-β1诱导的肺成纤维细胞24h、48h后,能够明显降低α-SMA蛋白表达水平,并呈时间依赖性;(3)细胞免疫荧光染色结果显示4μM蓝萼甲素可减少TGF-β1诱导的肺成纤维细胞转化过程中细胞肌丝的形成;(4)胶原凝胶收缩实验结果表明4 μM蓝萼甲素能明显降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞胶原收缩能力;(5)蓝萼甲素显著下调TGF-β1刺激的MRC-5细胞中的基质蛋白Fibronectin的表达水平;(6)蓝萼甲素显著下调TGF-β1诱导的MRC-5细胞中Smad2的磷酸化表达水平,但不影响Smad3的磷酸化表达水平;(7)蓝萼甲素显著抑制TGF-β1刺激的MRC-5细胞中的GSK3β的磷酸化表达水平,但对ERK1/2的磷酸化表达水平无影响;(8)采用SILAC定量蛋白质组学分析蓝萼甲素抑制肺成纤维细胞转化过程中蛋白质的变化情况,发现可能与肺成纤维细胞转化相关的19个蛋白质表达水平下调,同时有6个蛋白质表达水平发生了上调。结论:蓝萼甲素能够显著抑制肺成纤维细胞转化并下调基质蛋白Fibronectin的表达水平,这可能与蓝萼甲素抑制Smad2的活化及下调GSK3β磷酸化水平相关,同时蛋白质组学结果也为蓝萼甲素分子机制的阐明提供了线索。