【摘 要】
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目的研究甲基莲心碱（neferine,NEF）对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP增殖、对耐药细胞内顺铂敏感作用及细胞内GST-π（ glutathione S-transferase-π）基因表达的影响,初步探讨NEF对人
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目的研究甲基莲心碱（neferine,NEF）对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP增殖、对耐药细胞内顺铂敏感作用及细胞内GST-π（ glutathione S-transferase-π）基因表达的影响,初步探讨NEF对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的逆转作用,为临床开发应用NEF作为化疗增敏药及耐药逆转剂提供实验依据。方法（1）体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3及其耐顺铂细胞株SKOV3/DDP至对数生长期;（2）采用免疫细胞化学法检测GST-π蛋白在人卵巢癌细胞中的表达;（3）采用细胞毒实验（MTT）法筛选NEF对耐药株的无毒剂量,并测定无毒剂量Nef干预SKOV3/DDP后耐药性变化;（4）应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测耐药细胞和亲本敏感细胞GST-πmRNA水平表达的差异,分析NEF对GST-π表达的影响。结果（1）单用NEF对SKOV3/DDP细胞生长有抑制作用,且随活性浓度增加增殖抑制率相应上升,该作用与药物剂量呈依赖关系,1、5、10 ug/ml NEF对细胞无明显细胞毒性,（细胞抑制率小于10%）,本实验选用无毒剂量10ug /ml作为逆转剂量;当DDP与无毒剂量NEF联合作用时,使DDP对SKOV3 /DDP的IC50分别下降,且逆转倍数随药物作用时间延长而增大,分别为1.15、1. 91、2.28倍,各时间组间有显著统计学意义（ P < 0 . 01）;（2）免疫细胞化学染色后,镜下SKOV3/DDP细胞中GST-π表达高于敏感SKOV3细胞,当NEF作用其72h后GST-π表达明显减弱,呈弱阳性表达;（3）RT-PCR结果显示:SKOV3/DDP细胞GST-πPCR扩增带亮度较敏感SKOV3强,NEF处理组PCR扩增带亮度随作用时间逐渐减弱,且各组之间有显著差异（P < 0 . 01）。结论NEF能有效逆转SKOV3/DDP细胞对顺铂耐药的作用,其机制与下调GST-π基因的过表达密切相关。
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