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背景胰腺癌是常见的恶性肿瘤之一,具有发病率高、死亡率高、预后差等特点。而目前以手术为主的传统治疗手段疗效差强人意。随着对肿瘤分子机制研究的深入,基因治疗等新兴疗法将有助于提高肿瘤治疗效果。基因治疗具有靶向性、特异性的优点。p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)在p53介导的凋亡通路中发挥着重要的作用,可以通过p53依赖途径和p53非依赖途径介导凋亡,具有比p53更强大的促凋亡作用,是理想的基因治疗靶点。目前以PUMA为靶点的基因治疗在肺癌、食管癌、绒毛膜癌等的研究中都取得一定进展,但在胰腺癌的相关研究未见报导。目的研究PUMA在胰腺癌细胞系中的表达及意义;探讨PUMA过表达对人胰腺癌细胞系增殖、凋亡及PUMA相关基因p53、Caspase-3、PARP表达的影响;研究腺病毒介导的PUMA基因疗法联合化疗药物对人胰腺癌细胞的生物学影响。方法应用细胞培养、腺病毒感染、CCK-8比色法等分析Ad-PUMA和Ad-p53过表达对人胰腺癌细胞系生物学行为的影响。应用DNALadder法、核DAPI染色法、流式细胞术检测分析PUMA过表达对人胰腺癌细胞凋亡的影响。应用细胞培养、腺病毒感染,结合固定化蛋白质印迹法(Western blot)及反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外源性PUMA基因过表达对p53、Caspase-3、PARP表达的影响。应用细胞培养、腺病毒感染、CCK-8比色法、流式细胞术等分析Ad-PUMA联合化疗药对人胰腺癌细胞系MiaPaCa-2的生物学影响。裸鼠移植瘤模型进行Ad-PUMA及联合化疗药的体内抑瘤试验。结果成功构建了表达PUMA的重组腺病毒Ad-PUMA,经感染在四种人胰腺癌细胞(MIA PaCa-2,P3,PANC1,SW1990)中均可高效率表达。将Ad-PUMA导入细胞后,CCK-8法证实PUMA过表达可抑制胰腺癌细胞增殖,促进凋亡,其促凋亡作用较Ad-p53强大、快速。通过DNALadder法、核DAPI染色法、流式细胞术检测显示,腺病毒介导的PUMA基因(Ad-PUMA)感染人胰腺癌细胞后可诱导凋亡发生。RT-PCR及Westernblot等方法证实Ad-PUMA感染MIA PaCa-2细胞6小时后即有表达,可促进Caspase-3的活化并诱导PARP的剪切。在MIA PaCa-2和PANC1细胞中证实Ad-PUMA联合化疗药(cDDP,5Fu,Gemzer)对胰腺癌细胞的增殖抑制作用具有协同效应,可能是通过诱导细胞内PUMA表达升高而发挥作用。裸鼠MIA PaCa-2移植瘤实验结果表明瘤内注射Ad-PUMA可明显抑制Mia PaCa-2细胞移植瘤的生长,并且与化疗药联合应用具有显著性差异。结论外源PUMA导入具有明显的胰腺癌细胞生长抑制作用,这种作用是通过诱导细胞凋亡介导的,对细胞周期无明显影响。外源PUMA导入诱导细胞凋亡可能是通过激活化Caspase3并诱导PARP剪切失活来诱导肿瘤细胞的凋亡。在胰腺癌细胞系Mia PaCa-2和PANC1中,小剂量Ad-PUMA与化疗药(cDDP,5-FU,Gemzer)联合应用具有协同作用。裸鼠移植瘤实验结果证实瘤内注射Ad-PUMA可明显抑制Mia PaCa-2细胞移植瘤的生长,并且可以提高化疗药物的敏感性。