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目的:体外建立对尼洛替尼(nilotinib,AMN107)耐药的慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562-RN,并探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)增强K562-RN细胞对AMN107敏感性的研究。 方法:以AMN107浓度递增的方法诱导人白血病细胞株K562,使其建立耐药细胞株(K562-RN),MTT法确定其耐药倍数。采用 RAPA与 AMN107联用或单独处理K562-RN细胞,MTT增殖抑制实验观察对K562-RN细胞生长抑制的影响,AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测MDR1、mTOR、HO-1、BCL-2和Caspase-3 mRNA的表达及Western blot分析BCR-ABL、P-GP、mTOR、HO-1、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达。RQ-PCR法检测BCR-ABL融合基因的拷贝数。 结果:成功建立了针对 AMN107耐药的人白血病细胞株 K562-RN;其耐药倍数为K562细胞的2.01倍。200或100nmol/L RAPA与不同浓度的AMN107结合不同程度的增强 K562-RN对 AMN107的敏感性;流式细胞术结果显示:对照组(K562-RN),200nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,100nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,20μmol/L AMN107组,200nmol/L RAPA组及100nmol/L RAPA组的细胞凋亡率分别为7.77%、57.04%、55.37%、19.39%、33.23%和12.81%。200或100nmol/L RAPA联合应用AMN107降低MDR1,mTOR,HO-1,BCL-2 mRNA表达以及降低BCR-ABL,P-GP,mTOR,HO-1,BCL-2蛋白水平的表达,同时增加Caspase-3 mRNA以及蛋白水平的表达,差异具有统计学意义(p<0.05)。RQ-PCR法检测结果显示对照组(K562-RN),200nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,100nmol/L RAPA+20μmol/L AMN107组,20μmol/L AMN107组,200nmol/L RAPA组及100nmol/L RAPA组的BCR-ABL融合基因拷贝数分别为(1.53×109±0.06)、(2.16×108±0.04)、(4.36×108±0.03)、(9.67×108±0.09)、(6.48×108±0.07)及(1.42×109±0.05),差异有统计学意义(p<0.05)。 结论:成功建立了对AMN107耐药的人白血病细胞株K562-RN,并一定浓度剂量的RAPA能显著性增强K562-RN细胞对AMN107的敏感性。