复方苦芩对犬细小病毒病防治作用及药理研究

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犬细小病毒病自1978年在美国被证实以来,约经两年左右传播至全球,一年四季均可发生,不同年龄、性别、品种的犬均可感染,死亡率很高,给养犬业造成较大的危害,目前世界范围内对此病尚无特异性的治疗方法。按照中兽医理论分析,犬细小病毒病为湿热疫毒侵袭机体,壅阻胃肠,伤害脾胃,致使脾运化水谷与水湿功能失常,属湿热泻痢。用药宜清利湿热,止痢。复方苦芩制剂是根据中兽医学理论和临床辩证的原则,选用由黄芩、苦参、白头翁等组成的中药复方制剂,拟发挥清热,解毒,利湿,止痢,止呕等作用。首次研究纯中蓟复方制剂对犬细小病毒病防治效果、免疫试验、体外抗菌试验,解热试验及其安全性试验。第一,我们按照中药组方依据,充分考虑临床用药剂型选择,筛选出黄芩、苦参、白头翁等中草药进行组方,用水提醇沉法提取,制备成颗粒剂和注射液,并通过优化增溶剂、抗氧剂、过滤材料等条件,得出最佳条件,将制成的制剂进行质量研究。结果表明,加入0.5%的增溶剂吐温-80,0.2%的亚硫酸氢钠,滤膜过滤,制成的注射液呈红棕色證明液体,无沉淀,pH 6~8,黄芩苷含量为30mg/ml,苦参碱含量为10mg/ml;复方苦芩颗粒剂为黄棕色干燥均匀颗粒,每克颗粒剂含黄芩苷90mg,含苦参碱30mg。第二,通过建立犬细小病毒病模型,用复方苦芩注射液和颗粒剂进行防治,判定其防治效果,试验表明实验犬感染犬细小病毒后第6天,复方苦芩颗粒剂预防组犬保护率达90%,复方苦芩颗粒剂治疗组犬保护率50%,复方苦芩注射液预防组犬保护率也达到90%,复方苦芩注射液治疗组犬保护率70%,白乌汤对照组犬保护率仅30%,并通过对犬心肌,胃肠的组织切片观察可知,复方苦芩能有效抵抗犬细小病毒所致犬心肌损伤,胃肠出血等,证明复方苦芩对犬细小病毒病有较好的防治效果。第三,通过细胞计数、血清蛋白电泳、巨噬细胞吞噬试验,测定免疫细胞、γ-球蛋白、巨噬细胞的吞噬百分率、吞噬指数变化,结果显示复方苦芩能有效提高白细胞数量和淋巴细胞、单核细胞所占的比例,增加γ-球蛋白的相对含量,提高巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。通过感染犬细小病毒,致F81细胞发生病变,观察复方苦芩对其细胞病变的抑制作用,结果表明复方苦芩对犬细小病毒的IC50为1:587.5,不同稀释倍数药液对病毒增殖影响较大,20倍浓度对病毒的抑制指数最大,抑制率最高。通过药物LD50的测定,结果显示LD50为16.7g/kg,大于临床用药的100倍以上,安全可靠。通过建立家兔发热模型,用复方苦芩进行治疗判定其解热作用,结果显示复方苦芩高剂量组给药两小时时,体温可降低0.5℃,两小时后体温继续下降,4小时后恢复至正常体温。跟柴胡注射液对照组效果相当,低剂量组给药两小时时,体温降低0.2℃,7小时后恢复至正常体温;体外抑菌试验结果表明,复方苦芩具有一定的体外抑菌作用,其中对大肠杆菌的MIC为3.75mg/ml、对金黄色葡萄球菌的MIC为1.875mg╱ml、对猪源魏氏梭菌的MIC为15mg/ml、对沙门氏菌及白色念珠菌的MIC为7.5mg╱ml。本研究表明,复方苦芩能有效防治犬细小病毒病,保护病犬心脏及胃肠,抑制出血,维持病犬的白细胞在一个正常范围内,提高淋巴细胞和单核细胞所占比例,对犬细小病毒所致的细胞病变有一定的抑制作用,有效降低发热,并能抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等多种菌的生长,临床用药安全可靠。
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