目的:1.研究胆碱能受体激动剂卡巴胆碱对大鼠腹腔粘连形成的干预作用;2.研究卡巴胆碱对粘连组织微血管生成和微血管内皮细胞VEGF表达的影响及其与胆碱能抗炎通路的关系。方法:分动物实验和细胞实验两部分1.动物实验采用健康雄性60-70日龄Wistar大鼠,体重(200～220)g,完全随机法分为8组:①假手术组(S组,n=8),开腹后不做任何处理;②腹腔粘连组(A组,n=14),行腹腔粘连手术;③卡巴胆碱处理组(C组,n=14),腹腔粘连术后腹腔注射卡巴胆碱(60μg/kg.ml);④烟碱处理组(N组,n=14),腹腔粘连术后腹腔注射烟碱(1mg/kg.m1);⑤生理盐水组(NS组,n=8),腹腔粘连术后腹腔注射生理盐水(1ml/kg);⑥α-银环蛇毒素组(α组,n=12),腹腔粘连术后腹腔注射α-银环蛇毒素(1μg/kg.ml);⑦卡巴胆碱+α-银环蛇毒素组(c/α组,n=12),腹腔粘连术后腹腔注射α-银环蛇毒素(1μg/kg.ml),15分钟后腹腔注射卡巴胆碱(60μg/kg.ml);⑧烟碱+α-银环蛇毒素组(N/α组,n=12),腹腔粘连术后腹腔注射α-银环蛇毒素(1μg/kg.ml),15分钟后腹腔注射烟碱(1mg/kg.ml)。采用无菌干纱布摩擦大鼠盲肠蚓突末端复合左侧腹壁缝合固定硅胶膜法制作大鼠腹腔粘连动物模型,于术毕即刻、术后24小时、48小时腹腔局部注射药物,术后第10天处死大鼠。用Chiang分类法评估大鼠大体腹腔粘连程度。取粘连组织切片行HE染色观察粘连组织病理变化及微血管增生情况,免疫组织化学法检测粘连组织VEGF表达,并进行图像分析。2.细胞实验采用组织块法培养wistar大鼠肺微血管内皮细胞。实验分为7组:①TNF-α组(T组):TNF-α终浓度为10ng/ml;②卡巴胆碱+TNF-α组(C组,分5个亚组,卡巴胆碱终浓度分别为2mmol/l(C1组)、0.2mmol/l(C2组)、0.02mmol/l(C3组)、2μmol/l(C4组)、0.2μmol/l(C5组),TNF-α终浓度为10ng/ml);③烟碱+TNF-α组,(N组,烟碱终浓度为0.2mmol/l,TNF-α终浓度为10ng/ml);④α-银环蛇毒素+TNF-α组,(α组,α-银环蛇毒素终浓度为6μg/ml,TNFα-终浓度为10ng/ml);⑤α-银环蛇毒素+卡巴胆碱(C2)+TNF-α组,(C2/α组,α-银环蛇毒素终浓度为6μg/ml,卡巴胆碱终浓度为0.2mmol/l,TNF-α终浓度为10ng/ml);⑥α-银环蛇毒素烟碱组+TNF-α(N/α组,α-银环蛇毒素终浓度为6μg/ml,烟碱终浓度为0.2mmol/l,TNF-α终浓度为10ng/ml);⑦单纯细胞组(B组),只加细胞和培养液,不加其它试剂。通过倒置相差显微镜观察细胞形态、CD31和Ⅷ因子免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。MTT法检测大鼠肺微血管内皮细胞增殖情况。ELISA法检测肺微血管内皮细胞VEGF的生成。结果:1.假手术组大鼠未出现腹腔粘连,腹腔粘连组14只大鼠均出现了腹腔粘连,粘连评分区间为6-12分,说明摩擦大鼠盲肠蚓突末端复合左侧腹壁缝合固定硅胶膜法可成功制作大鼠腹腔粘连动物模型。2.倒置相差显微镜下观察见培养细胞呈梭形,铺路石样排列,单层贴壁生长,CD31和Ⅷ因子免疫细胞化学染色呈阳性反应,说明培养细胞为肺微血管内皮细胞。3.与腹腔粘连组比较,经卡巴胆碱和烟碱处理后,大鼠腹腔粘程度明显减轻,粘连组织微血管生成及VEGF表达减少;用α-银环蛇毒素阻断α7nAchR后,卡巴胆碱、烟碱抑制腹腔粘连的作用明显减轻。4.卡巴胆碱、烟碱能抑制TNF-α刺激后大鼠肺微血管内皮细胞增殖及VEGF生成,阻断微血管内皮细胞α7nAchR能显著减轻拟胆碱药的作用。结论:卡巴胆碱能明显减轻大鼠腹腔粘连程度;其机制可能与其兴奋α7nAChR,下调粘连组织中促炎因子水平、抑制粘连组织微血管生成和微血管内皮细胞VEGF表达有关。