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目的:临床上约5%~10%慢性肝病患者依据临床表现、生化及血清学检查仍不能明确病因,其中一部分患者通过肝穿刺活检和(或)血清HBV DAN检测,确诊为隐匿性HBV感染(Occult Hepatitis B virus infection)。我国是乙型肝炎的高发区,对隐匿性乙型肝炎应引起重视。为此,本课题研究一组不明原因性肝炎患者隐匿性HBV感染情况并从基因变异角度研究HBV隐匿性感染的分子机制。方法:(1)病历选择和血清收集:不明原因性肝炎患者104例,收集临床资料并清晨空腹静脉采血。(2)模板制备:分别用直接煮沸法、辛酸钠法、蛋白酶K消化-酚-氯仿法、PEG8000法、辛酸钠-酚-氯仿法、碱裂解法、柱抽提法,抽提血清中HBV DNA,比较各抽提方法的目的基因得率、灵敏度及重复性。寻找适合于HBV隐匿性感染模板制备方法。(3)引物设计:HBV基因组不同区段分别设计2套巢式引物,比较扩增效率,选择扩增效率高的引物。(4)巢式PCR扩增,查出隐匿性HBV感染者。(5)HBV S、X区扩增产物测序和变异位点分析,发现可能和HBV隐匿性感染有关的变异位点。结果:(1)在7种不同的抽提方法中,辛酸钠-酚-氯仿法在目的基因得率、灵敏度、重复性方面均优于其它方法。(2)104例不明原因性肝炎患者中查出隐匿性HBV感染13例。(3)S基因区未发现有义突变,X基因区及重叠核心启动子区、增强子Ⅱ区发现多位点变异,可能与HBV隐匿性感染有关。结论:辛酸钠-酚-氯仿法在隐匿性HBV感染DNA检测中有较好的效果。本组不明原因性肝炎病人中约有12.5%为隐匿性HBV感染。X基因区及重叠核心启动子区、增强子Ⅱ区多位点变异可能是HBV隐匿性感染的分子基础。