野油菜黄单胞菌野油菜致病变种基因组中dctA基因的功能鉴定

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碳素的吸收和利用是病原细菌在寄主植物的质外体成功定殖、扩展的基础之一。通常情况下,在植物质外体中葡萄糖的含量较低,病原细菌往往利用糖异生途径合成葡萄糖用于代谢。糖异生途径的底物大多属于四碳二羧酸,四碳二羧酸的吸收、转运、利用系统可能与病原细菌致病相关。四碳二羧酸(苹果酸,延胡索酸,琥珀酸,草酰乙酸)和四碳二羧酸类氨基酸天门冬氨酸转运主要依靠四碳二羧酸转运系统(Dct)。在野油菜黄单胞菌野油菜致病变种8004菌株(Xcc 8004)基因组的功能注释中存在dctA、dctP和dctQ。本研究是在此基础上,通过生物信息学分析发现,除了dctA、dctP和dctQ之外还存在与dctB、dctD、dctM、dctS、dctR相似的四碳二羧酸转运相关基因,这表明在Xcc 8004中可能存在多个四碳二羧酸转运系统。本工作主要对这些系统中编码四碳二羧酸转运蛋白基因dctA进行了功能鉴定。我们利用pK18mob整合突变方法获得了dctA的非极性突变体,对该突变体的碳源利用能力检测表明,但dctA突变体在延胡羧酸羧酸为唯一碳源无碳源的基本培养基(noncarbohydrate minimal medium,NOM)平板上几乎不生长,而野生型在此条件下生长正常;而在苹果酸、琥珀酸上生长比野生型减缓。dctA突变体的致病相关生化因子检测发现与野生型没有显著差异,植株实验证明dctA基因与致病性无关。
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