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动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)导致的心脑血管疾病是当今人类死亡死亡的首要原因。虽然早在100多年前AS的概念已被提出，也有大量的国内外文献对其发病机制进行了一系列深入的研究，但其死亡率、发病率和致残率仍居高不下，给社会和家庭带来了沉重的负担。因此，对AS的防治显得尤为重要。AS的发生与发展是一个多因素在多层次上相互综合作用的过程，被认为是一种慢性炎症性疾病。AS是各种炎症损伤致使血管壁发生炎症-增殖反应，该反应过程包括内皮的损伤，血管平滑肌细胞发生增殖、迁移以及分泌细胞外基质、炎症因子等诸多环节。AS以巨噬细胞或平滑肌细胞摄取脂质成分形成泡沫细胞为主要特征，在AS的中晚期又以后者为主要成分。因此，深入了解平滑肌源性泡沫细胞形成的分子机制，确定调节这一过程的关键分子，并早期给予干预，可为AS的防治提供新的靶点。TLR4(Toll like receptor4)是TLR家族中的一员，广泛表达于巨噬细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞、脂肪细胞等，是启动炎症反应的一个重要的上游分子，也是调控炎症过程的一个关键靶点。大量的研究报道，TLR4参与了AS这一慢性炎症病变过程。TLR4活化后，促进VSMCs异常增殖并迁移致内膜。此外TLR4还诱导VSMCs从收缩表型转换为分泌表型，释放大量细胞因子与炎症因子，如IL-1β，IL-6，TNF-α，MCP-1，细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1等的释放也增加，进一步加重局部炎症反应，VSMCs转换为分泌型后，更容易吞噬脂质，形成脂质小体。ABCA1(三磷酸腺苷-结合盒转运子A1)是细胞膜上的脂质转运体，主要介导胆固醇外流，与apoA-Ι结合形成成熟的HDL。研究证实，动脉粥样硬化病灶部位ABCA1表达显著减少。LPS(脂多糖，TLR4配体)可诱导巨噬细胞中ABCA1表达下调。ABCA1基因突变可引起Tangier病，该病患者更易伴发动脉粥样硬化。据此，我们推测TLR4介导的ABCA1表达异常参与平滑肌源性泡沫细胞的形成。方法：1. DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型2.组织块贴块法培养原代血管平滑肌细胞；3. α-SMA及SM-22α免疫荧光双边染色鉴定原代VSMCs；4.细胞免疫荧光染色观察NF-κB核转位及VSMCs中TLR4与ABCA1共定位；5. RT-qPCR和/或Western blot法检测VSMCs内TLR4、ABCA1、IL-1β及TNF-α表达水平；6.油红O染色鉴定VSMCs内脂质沉积及异丙醇萃取VSMCs中油红O，并于518nm处测量其吸光度值。结果：1.体外培养及鉴定了原代血管平滑肌细胞。2.经免疫荧光染色鉴定出TLR4及ABCA1共表达于WT VSMCs中。3．oxLDL刺激WT VSMCs后，TLR4通路活化，TLR4表达增高，诱导NF-κB发生核转位，促进炎症因子IL-1β及TNF-α的分泌；TLR4基因敲除后抑制VSMCs中NF-κB核转位及抑制炎症因子的分泌。4．oxLDL刺激TLR4活化后，参与下调VSMCs中ABCA1表达；TLR4基因敲除后，能逆转oxLDL刺激下VSMCs中ABCA1表达下调。5. TLR4介导的ABCA1表达下调促进VSMCs中脂质的沉积，TLR4基因敲除后，部分减轻VSMCs中脂质的沉积。结论：TLR4通过下调ABCA1表达促进平滑肌源性泡沫细胞的形成。