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第一部分：慢病毒表达载体的构建及沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达目的：构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达。方法：根据FOXQ1基因的序列,设计合成3对shRNA干扰序列,退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro,将重组质粒转化至STB13感受态中,涂板培养挑取单菌落,摇菌后小提质粒,选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提,将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev, pMDlg-pRRE, pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞,收集病毒上清,感染目的细胞DLD-1,嘌呤霉素筛选FOXQ1沉默细胞,经荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果。结果：酶切及测序结果显示shRNA成功插入载体PLKO.1-puro中,共转染293-T细胞成功获取病毒上清,感染DLD1细胞,经嘌呤霉素筛选出FOXQ1沉默细胞,荧光定量PCR及Western blot鉴定FOXQ1基因表达最高抑制率为90.4%。结论：通过构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,成功获取FOXQ1基因沉默细胞。为后续FOXQ1基因在肿瘤发生发展的研究奠定实验基础。第二部分：大肠癌FOXQ1与EGFR基因的相关性研究目的：探讨大肠癌FOXQ1与EGFR基因间的相关性,为今后研究大肠癌中FOXQ1基因在EGFR-PI3K-Akt通路中的作用机制奠定基础。方法：应用荧光定量PCR检测大肠癌细胞系DLD1, HT29, HCT116, LOVO中FOXQ1及EGFR基因mRNA相对表达量；荧光定量检测经shRNA-FOXQ1慢病毒干扰后的DLD1细胞(命名为DLD1-shRNA-FOXQ1)中EGFR的相对表达量改变；DLD1-shRNA-FOXQ1经EGFR酪氨酸激酶抑制剂Erlotinib HC1和siRNA-EGFR处理后,荧光定量PCR分别检测FOXQ1和EGFR基因mRNA相对表达量。结果：(1)大肠癌细胞系中FOXQ1与EGFR基因的表达水平：FOXQ1在DLD1、HT29、LOVO、HCT116中的相对表达量分别为83.09、59.58、0.06、0.03,EGFR在DLD1、HT29、LOVO、HCT116中的相对表达量分别为4.95、3.67、2.08、1.36；(2)经shRNA-FOXQ1干扰的DLD1细胞EGFR表达量随FOXQ1表达量的降低而增高；(3)细胞DLD1-shRNA-FOXQ1、DLD1-shRNA-Control分别经siRNA-EGFR处理抑制EGFR的表达后,FOXQ1表达量随EGFR表达量的降低而增高,经Erlotinib HC1阻断EGFR酪氨酸激酶后,FOXQ1表达量增高。结论：大肠癌细胞系中FOXQ1与EGFR基因的表达趋势基本一致；大肠癌中FOXQ1的表达被抑制后,EGFR表达升高,而EGFR的表达或其蛋白激酶活性被抑制后,FOXQ1表达升高；推测二者间可能存在相互负反馈调节机制,从而维持大肠癌细胞中FOXQ1与EGFR高表达的状态。