论文部分内容阅读
阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是最常见的引起老年人痴呆的神经退行性病变,目前缺乏有效延缓发病进程的药物和治疗手段。促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)衍生物由于具有疾病修饰作用,在神经退行性疾病方面的应用备受关注。脯氨酸羟化酶(Proline Hydroxylase Domain,PHD)抑制剂是一类重要的EPO衍生物,可通过稳定缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible Factor,HIF)调控EPO表达,参与一系列病理生理过程。研究报道PHD抑制剂可以提高健康小鼠的学习记忆能力,但是病理条件下即认知障碍的AD模型鼠,PHD抑制剂是否可以改善AD症状,干预病理进程尚未见报道。本研究应用LC-MS/MS技术建立FG-4592的检测方法,腹腔给药后测定小鼠血浆及脑组织内的药物浓度。建立东莨菪碱诱导的急性胆碱能障碍痴呆模型,通过Morris水迷宫等实验考察FG-4592对东莨菪碱痴呆模型鼠认知障碍的改善作用;运用RT-PCR、蛋白印迹等技术,研究FG-4592对HIF及EPO、胆碱能神经元、神经炎症的影响。采用APP/PS1双转基因鼠模型,通过Morris水迷宫实验考察FG-4592对认知障碍的改善作用,运用RT-PCR、免疫组化等技术研究FG-4592对Aβ沉积,Tau蛋白异常磷酸化及APP代谢的影响。结果表明,FG-4592腹腔给药后在血液中吸收良好,可透过血脑屏障,脑药浓度约在20 min达峰。东莨菪碱诱导的急性胆碱能障碍痴呆模型中,FG-4592干预后可提高小鼠的学习记忆能力,此作用可以被HIF抑制剂Acriflavine Hydrochloride 逆转;FG-4592 上调海马内 EPO、HIF-1α、HIF-2α 蛋白表达;抑制皮层乙酰胆碱酯酶活性,提高胆碱乙酰转移酶蛋白、囊泡乙酰胆碱转运蛋白、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response Element Binding Protein,CREB)、p-CREB表达;下调炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8基因和蛋白表达;提示FG-4592症状改善作用与稳定HIF表达,上调EPO,提高胆碱能神经元功能以及抑制神经炎症反应相关。APP/PS1双转基因鼠模型中,FG-4592干预后可改善学习记忆功能;提高脑内EPO表达,下调APP蛋白表达,减少脑内Aβ沉积,降低Tau蛋白磷酸化水平,提高α分泌酶活性。提示FG-4592通过干预AD特征病理产物发挥疾病修饰的作用。综上,FG-4592可改善AD模型鼠的认知功能,同时也能干预AD病理进程,发挥疾病修饰作用。本研究阐明PHD抑制剂用于防治AD的潜能以及可能的调控机制,拓展PHD抑制剂在神经退行性疾病方面应用,有助于加深理解AD病理生理过程,为寻找有效的AD治疗靶标提供创新思路和实验依据。