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前言子痫前期（pre-eclampsia，PE）是人类妊娠期特有的疾病，它是以周身小血管痉挛性收缩致母体血压升高、组织器官包括肾脏、子宫、胎盘等血液灌流量减少，继而出现蛋白尿、水肿等一系列综合征为特征的妊娠期高血压失调性疾病。关于子痫前期的病因和发病机制虽尚未完全阐明，但随着分子生物学的发展，其病因学方面的研究也不断取得新的进展。目前普遍认为血管内皮细胞功能失调或损伤是子痫前期发病的中心环节，甚至有学者认为子痫前期即为血管内皮损伤性疾病。导致血管内皮细胞的损伤机制可能与痫前期患者的血清中存在某些毒性因子有关，其中细胞粘附分子（CAMs）表达异常在子痫前期血管内皮细胞损伤中起重要作用。CAMs表达增强，可介导大量的白细胞与内皮细胞粘附，粘附后的白细胞可通过释放一系列的细胞毒性物质，如细胞因子、氧自由基、弹性蛋白酶等介导炎症反应，直接或间接造成内皮细胞功能失调和损伤。核因子-kappaB（nuclear factor kappa B，NF-κB）是近年发现的一个多功能核转录因子，具有广泛的生物学活性，它可被许多的诱导剂激活，激活后可促进多种炎症介质如细胞因子（TNF-α、IL-1、IL-8等）、粘附分子（ICAM-1、VCAM-1、P-selectin等）等基因的转录，使这些细胞因子、黏附分子的表达增强，从而导致妊娠期高血压疾病的发生。当应用某些药物抑制NF-κB的激活，能明显的下调ICAM-1、VCAM-1的表达。因此NF-κB的激活是子痫前期患者血管内皮细胞功能失调或损伤的重要环节，在妊娠期高血压疾病的发病机制中起重要作用。碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor，bFGF）是迄今发现的促内皮细胞增殖作用最强的生长因子。bFGF在体内分布广泛，其受体几乎在所有细胞上表达，包括内皮细胞、神经元、平滑肌细胞和纤维细胞等。局部组织细胞产生的bFGF以自分泌和旁分泌的形式维持内皮细胞的生长，并能够和基膜细胞外基质中硫酸乙酰肝素结合，以结合型的形式储存在组织中。当组织损伤时，基膜细胞外基质受破坏，结合的bFGF游离出来，与相应的受体结合，而发挥不同的作用，因此为促进组织修复打下良好的基础。此外，bFGF还是潜在性的血管内皮细胞丝裂原，可明显的加快并促进损伤后血管内皮细胞的修复。关于子痫前期的发病与bFGF的关系目前报道罕见，在针对非子痫前期的一些体外试验表明，用外源性bFGF干预体外培养的血管内皮细胞。可发现其呈现的保护性治疗效果。这种作用与其能明显下调静止或被细胞因子刺激的人类脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell，HUVEC）的细胞间黏附分子-1（Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1），血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhension-1，VCAM-1），E-选择素（E-selectin）及单核细胞化学诱导产物的表达有关。提示bFGF在内皮细胞激活及损伤等方面起到一个调节者的作用。因此我们设想用外源性bFGF干预受子痫前期患者血清影响的HUVEC，观察其能否影响的CAMs的表达以及其可能发挥作用的路径，以期为子痫前期的治疗提供一个新的途径。目的本研究通过观察子痫前期血清中可溶性的细胞间黏附分子-1（soluble Intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1），可溶性血管细胞黏附分子-1（soluble vascular cell adhension-1，sVCAM-1）和bFGF的含量变化以及观察被重度子痫前期患者血清刺激的HUVEC（人类血管内皮细胞株，ECV-304）NF-κB的激活及其与ICAM-1、VCAM-1表达的关系，来探讨它们在子痫前期血管内皮细胞损伤中的作用以及bFGF是否对子痫前期血清诱发的血管内皮细胞损伤具有保护性的作用。方法1、子痫前期患者血清中bFGF的变化及意义按照乐杰主编《妇产科学》第6版子痫前期诊断标准，随机选择在2005年9月-2006年4月于我院分娩的子痫前期患者共30例[PE组，轻度（mild PE group）及重度（severe PE group）各15例]，均为单胎妊娠，无其它妊娠合并症及并发症]。随机选择同期无妊娠合并症及并发症的单胎正常妊娠孕妇10例作对照组，两组孕妇的年龄及孕周差异无显著性。采用酶联免疫吸附法（ELISA）对子痫前期患者血清中sICAM-1，sVCAM-1和bFGF的浓度进行检测。结果进行t检验及直线相关分析。2、子痫前期患者血清对ECV-304影响的研究按照乐杰主编《妇产科学》第6版子痫前期诊断标准，随机选择在2005年9月-2006年4月于我院分娩的重度子痫前期患者共15例（PE group，均为单胎妊娠，无其它妊娠合并症及并发症）。随机选择同期无妊娠合并症及并发症的单胎正常妊娠孕妇10例作对照组（NP group）。两组孕妇的年龄及孕周差异无显著性。制备血清条件培养基，建立与血管内皮细胞株ECV304共同孵育的体外培养环境，采用免疫细胞化学染色法、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及免疫印迹（western Blotting）的方法，检测ECV-304细胞ICAM-1，VCAM-1的表达及NF-kappaB的活化，结果进行t检验及直线相关分析。3、bFGF对子痫前期血管内皮细胞损伤保护作用的研究制备含10ng／ml bFGF的血清条件培养，建立与ECV304共同孵育的体外培养环境（PE+bFGF10组）。采用免疫细胞化学染色法、反转录聚合酶链式反应及免疫印迹的方法，检测ECV-304细胞ICAM-1，VCAM-1的表达及NF-kappaB的活化，结果进行t检验及直线相关分析。结果1、子痫前期患者血清中bFGF的变化及意义（1）与对照组比较，轻度及重度子痫前期组血清sICAM-1，sVCAM-1水平均升高，且重度子痫前期组升高更为明显，并显著高于轻度组。（2）子痫前期组bFGF水平较对照组明显升高。轻度子痫前期组血清bFGF水平明显高于对照组和重度子痫前期组。重度子痫前期组血清bFGF水平与对照组相比无显著差异。（3）子痫前期组血清bFGF水平与sICAM-1，sVCAM-1水平均呈显著的负相关。2、子痫前期患者血清对ECV-304影响的研究（1）免疫细胞化学染色结果提示：与对照组比较，子痫前期血清培养的ECV-304细胞ICAM-1、VCAM-1和NF-κB表达均明显增强。（2） RT-PCR及Westen检测结果提示：与对照组比较，子痫前期血清培养的ECV-304细胞ICAM-1和VCAM-1的mRNA、蛋白水平的表达以及NF-κB的蛋白水平的表达均明显增强。（3）子痫前期组ECV-304细胞NF-κB的活化程度与ICAM-1及VCAM-1的表达水平呈明显的正相关。3、bFGF对子痫前期血管内皮细胞损伤保护作用的研究（1）免疫细胞化学染色结果提示：与子痫前期组比较，PE+bFGF10组ECV-304细胞ICAM-1、VCAM-1和NF-κB的表达明显降低，PE+bFGF10组ECV-304细胞NF-κB的表达高于对照组。（2） RT-PCR及Westen检测结果提示：PE+bFGF10组ECV-304细胞ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白水平的表达及NF-κB蛋白水平的表达均明显低于子痫前期组，而高于对照组。（3） PE+bFGF10组对ECV-304细胞NF-κB活化的抑制程度与ICAM-1及VCAM-1的表达水平呈明显的正相关。结论1、血清中bFGF在轻度子痫前期患者体内是升高的，而在重度患者体内是降低的，且与sICAM-1，sVCAM-1水平呈负相关。表明bFGF可能作为一种内皮细胞的保护性因子存在于血清中。2、子痫前期患者血清可使血管内皮细胞NF-κB激活，并上调内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达，两者共同参与了子痫前期的发病过程。3、外源性bFGF可以降低子痫前期患者血清刺激的ECV304细胞NF-κB的表达，进而下调被子痫前期患者血清刺激的ECV304细胞ICAM-1和VCAM-1的表达，推测外源性bFGF也许能做为一种内皮细胞的保护性因子，用于妊娠期高血压疾病的治疗。也为应用NF-κB的抑制剂达到对子痫前期的对因治疗提供了依据。