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目的:从新鲜百合中提取、分离纯化得到百合多糖,采用HPLC对其平均相对分子质量进行测定,并探讨其对Ⅰ型糖病尿大鼠的降血糖作用,为百合多糖的降血糖作用在临床上的应用提供理论依据。
方法:
(1)采用水提醇沉法从新鲜百合中提取得到百合多糖粗品,经DEAE-52纤维素柱层析、葡聚糖Sephadex G-100凝胶柱层析分离纯化得到三种多糖。
(2)建立测定葡聚糖的回归方程,采用HPLC测定分离纯化后得到的百合多糖相对分子量。
(3)采用腹腔注射STZ的方法建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型,对模型大鼠分组灌胃百合多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ治疗,进行百合多糖降血糖作用预实验研究,选取降血糖作用效果较好的百合多糖Ⅲ进一步研究。
(4)给予糖尿病大鼠高、低剂量百合多糖Ⅲ灌胃给药治疗4周。实验结束后股动脉取全血,处死全部大鼠,观察治疗前后体重变化;采用葡萄糖氧化酶法测定大鼠空腹血糖值(FBG),采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清胰岛素(INS),硫代巴比妥酸法测定大鼠血清丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定大鼠血清中超氧化物歧化酶活力(SOD),观察灌胃治疗后以上各项指标的变化。
(5)取肝脏,按照(己)糖激酶(HK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒的方法测定大鼠肝组织匀浆中各酶的活性,观察治疗后各组间大鼠酶活性的变化。
结果:
(1)从新鲜百合中分离纯化得到3种多糖:水洗百合多糖Ⅰ、NaCl溶液洗脱百合多糖Ⅱ、NaOH溶液洗脱百合多糖Ⅲ。
(2)百合多糖Ⅰ的平均相对分子质量为97672,百合多糖Ⅱ的平均相对分子质量范围为219927-465232,百合多糖Ⅲ的平均相对分子质量为94321。
(3)三种百合多糖均可减缓糖尿病大鼠体重的负增长,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);可降低其FBG,与模型组比较有显著性差异(P<0.05);其中百合多糖Ⅲ的效果最好。
(4)百合多糖Ⅲ高、低剂量组的糖尿病大鼠INS、HK、SDH、MDA和SOD活性与模型组比较有显著性差异。
结论:
(1)从新鲜百合中分离纯化得到3种百合多糖,采用HPLC方法测定其相对分子质量。
(2)百合多糖可减缓糖尿病大鼠体重的负增长,能显著降低糖尿病大鼠血糖,升高其胰岛素水平。其降糖作用一方面能通过提高糖代谢酶的活性,促进葡萄糖的摄取和利用,另一方面通过提高机体抗氧化功能,抑制氧自由基对胰岛β细胞的损伤,增加胰岛素分泌,调节Ⅰ型糖尿病大鼠的降血糖作用。